[发明专利]利用化学发光免疫技术测定层粘连蛋白的试剂盒

说明书

本发明公开了一种利用化学发光免疫技术测定层粘连蛋白的试剂盒，包括结合了层粘连蛋白单克隆抗体的磁微粒混悬液；辣根过氧化物酶标记的层粘连蛋白单克隆抗体；层粘连蛋白系列校准品，所述磁微粒混悬液和酶结合物中添加有释放剂。本发明的优点在于可快速有效的解离样本中聚合的LN分子，不会随着样本的存放发生变化；检测速度快，过程稳定、无放射性污染，在没有磁场存在的情况下，磁性微粒悬浮在液体中，使得抗原抗体反应类似于均相反应；磁性微粒在外加磁场的作用下可方便地分离；磁性微粒的粒径达到纳米级，使得包被固相接近于液相状态，相对微孔板式，减少了包被，封闭等多个影响精密性的操作步骤，检测的精密性和稳定性得到极大的提升。

技术领域

本发明涉及免疫分析医学两用，尤其是涉及一种利用化学发光免疫技术测定层粘连蛋白的试剂盒。

背景技术

层粘连蛋白（LN）是一种大分子糖蛋白，是由α、β、γ3条多肽链构成的异三聚体，分子量大于800kD。正常肝组织中LN含量很少．主要分布于血管壁、胆管壁及淋巴管壁等部位。肝纤维化时，大量沉积于肝窦内皮细胞间隙．降低内皮细胞的通透性使其毛细血管化，并使门脉压升高，故可反映肝窦毛细血管化和汇管区纤维化。同时，LN与肝纤维化形成的病因密切相关：研究表明，LN水平在酒精性肝硬化中明显高于病毒性和胆汁性肝硬化，并且可反映酒精性肝病是否存在门脉高压及门脉高压程度。

目前对层粘连蛋白的测定方法有：1、Elisa 测定方法：该方法一般用于半定量的测定，测定准确度、灵敏度、精密度较差，而且操作比较繁琐，不利于在临床中广泛应用。2、放射免疫测定方法 ：该方法因为试剂有放射性污染和试剂有效期短暂（半衰期）等缺陷在逐渐被淘汰。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术，是继放射免疫分析(RIA)和酶免疫分析(EIA)之后发展起来的一种超高灵敏度的微量测定技术，具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是目前免疫定量分析最理想的方法。

由于血清中的LN分子呈聚合态，只有部分位点暴露可以被抗体识别，但是这个状态下的检测结果是偏低的。血清被抽离体外之后，随着存放时间的增多，聚合态的LN分子会逐渐解离，这时检测结果会逐渐升高，在2-8℃的存放条件下，采血5-7天LN分子基本解离完全，检测结果达到平台期，而在-20℃的存放条件下，则需要数月才能完全解离。但是对于医院来说，当天是要出检测报告的，因此不能等待样本中的LN分子自行解离，而不进行解离的样本检测结果偏低，会造成医生的误判。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够快速解离样本中聚合的LN分子，从而准确测定层粘连蛋白的试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的利用化学发光免疫技术测定层粘连蛋白的试剂盒，包括结合了层粘连蛋白单克隆抗体的磁微粒混悬液；辣根过氧化物酶标记的层粘连蛋白单克隆抗体；层粘连蛋白系列校准品，所述磁微粒混悬液和酶结合物中添加有释放剂。

所述释放剂为柠檬酸、葡萄糖酸、三乙醇胺、8-苯胺-1-萘磺酸（ANS）、乙二胺四乙酸（EDTA）、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸（EGTA）、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）中的一种。

所述磁微粒的粒径为纳米级。