[发明专利]用于活体检测硝基还原酶的光声探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种用于活体检测硝基还原酶的光声探针，其特征在于：该光声探针的结构式如式I所示：

2.权利要求1所述的用于活体检测硝基还原酶的光声探针的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

①在氮气保护下，将DMF溶于二氯甲烷中，得到DMF溶液；

②将三氯氧磷溶于冰浴下的二氯甲烷中，然后将获得的三氯氧磷溶液加入到步骤①中得到的DMF溶液中，氮气保护下搅拌均匀，得到混合溶液；

③将环己酮加入步骤②中得到的混合溶液中，进行回流反应，再将反应后获得的混合物倒入冰水中过夜，得到化合物A；

④将1,2,2-三甲基苯并吲哚和碘甲烷溶于甲苯中，搅拌反应，反应结束后冷却至室温，过滤、洗涤，得到化合物B；

⑤将步骤③中得到的化合物A、步骤④中得到的化合物B，以及乙酸钠溶于乙酸酐中，搅拌反应，反应结束后冷却至室温，过滤、洗涤、真空干燥，过硅胶柱纯化，得到苯并Cy7-Cl；

⑥先将间苯二酚，碳酸钾加入无水乙腈中室温搅拌，再将苯并Cy7-Cl加入乙腈中加热搅拌，反应结束后，减压蒸干溶剂，过硅胶柱纯化，得到蓝绿色固体苯并Cy7-OH；

⑦取过柱纯化后的苯并Cy7-OH溶于乙腈中，再加入对硝基苄基氯甲酸酯和三乙胺，室温搅拌，得到蓝紫色溶液，减压蒸干溶剂得到粗产物探针苯并Cy7-NO₂，过硅胶柱纯化得到蓝紫色固体苯并Cy7-NO₂，即用于活体检测硝基还原酶的光声探针。

3.根据权利要求2所述的用于活体检测硝基还原酶的光声探针的制备方法，其特征在于：

步骤①中所述的DMF与二氯甲烷的体积比为1:1～1:2；

步骤②中所述的三氯氧磷与二氯甲烷的体积比为1.05:1～1.3:1；

步骤②中所述的三氯氧磷与所述DMF的体积比为1.05～1.3:2～2.7；

步骤③中所述的环己酮与所述混合溶液中三氯氧磷的体积比为1:2～2.5；

步骤④中所述的1,2,2-三甲基苯并吲哚和碘乙烷的体积比为1:0.9～1.2；

步骤④中所述的1,2,2-三甲基苯并吲哚用量为按每毫升甲苯配比0.2mL1,2,2-三甲基苯并吲哚计算；

步骤⑤中所述的化合物A、化合物B和乙酸钠的摩尔比为0.6：1.3：0.6；

步骤⑤中所述的化合物A用量为按每毫升乙酸酐配比0.2mmol化合物A计算；

步骤⑥中所述的间苯二酚与碳酸钾，苯并Cy7-Cl三者间的当量比为2.6～3.5：2.6～3.5：1；

步骤⑦中所述的苯并Cy7-OH与对硝基苄基氯甲酸酯和三乙胺的当量比为1：2.6：2.6。

4.根据权利要求3所述的用于活体检测硝基还原酶的光声探针的制备方法，其特征在于：

步骤①中所述的DMF与二氯甲烷的体积比为1:1；

步骤②中所述的三氯氧磷与二氯甲烷的体积比为1.05:1；

步骤②中所述的三氯氧磷与所述DMF的体积比为1.05:2；

步骤③中所述的环己酮与所述混合溶液中三氯氧磷的体积比为1:2；

步骤④中所述的1,2,2-三甲基苯并吲哚和碘乙烷的体积比为1:0.9；

步骤⑥中所述的间苯二酚与碳酸钾，苯并Cy7-Cl三者间的当量比为2.6：2.6：1。

5.根据权利要求2所述的用于活体检测硝基还原酶的光声探针的制备方法，其特征在于：

步骤②中所述的搅拌的时间为30min；

步骤③中所述的回流反应的条件为于80℃条件下进行回流反应3h；

步骤④中所述的搅拌反应的条件为于100℃条件下搅拌反应20h；

步骤④中所述的洗涤为采用乙酸乙酯进行洗涤；

步骤⑤中所述的搅拌反应的条件为于60℃条件下搅拌反应3h；

步骤⑤中所述的洗涤为依次用饱和碳酸氢钠溶液和水进行洗涤；具体通过如下步骤实现：先用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，直至无气泡出现，然后再用水洗涤两次；

步骤⑥中所述的中间苯二酚与碳酸钾在室温下搅拌的时间为10～20min；

步骤⑥中所述的加热搅拌的温度为50～60℃；

步骤⑦中所述的室温搅拌的时间为2～2.5h。