[发明专利]三链抗体、其制备方法及其用途

权利要求书

1.包含三条多肽链的三链抗体，其中第一多肽链包含第一重链可变结构域，第二多肽链包含第一轻链可变结构域，所述第一重链可变结构域与第一轻链可变结构域配对形成第一抗原结合位点；且第三多肽链包含单结构域第二抗原结合位点和单结构域第三抗原结合位点。

2.根据权利要求1所述的三链抗体，其中所述第一多肽链包含第一重链可变结构域和免疫球蛋白CH1结构域，第二多肽链包含第一轻链可变结构域和免疫球蛋白CL结构域。

3.根据权利要求1和2所述的三链抗体，其中所述第三多肽链的单结构域第二抗原结合位点和单结构域第三抗原结合位点之间具有或者不具有连接肽，

优选地，所述第三多肽链不包含免疫球蛋白CH1结构域。

4.根据权利要求1－3中任一项所述的三链抗体，其中所述单结构域第二抗原结合位点和单结构域第三抗原结合位点分别选自重链可变结构域(VH)、轻链可变结构域(VL)、天然缺乏轻链的抗体的重链可变结构域(例如，骆驼科物种中天然存在的重链抗体的重链可变结构域)、鱼类中称为新型抗原受体(NAR)的免疫球蛋白(如鲨鱼血清中天然存在的IgNAR)中的VH样单结构域、和重组的单结构域抗原结合位点(例如，骆驼化的人VH结构域、人源化的骆驼科抗体重链可变结构域)，例如，所述单结构域第二抗原结合位点和单结构域第三抗原结合位点分别选自骆驼科物种中天然存在的重链抗体的重链可变结构域、骆驼化的人VH结构域和人源化的骆驼科抗体重链可变结构域(它们简称为称为“VHH”)，由此，所述单结构域第二抗原结合位点和单结构域第三抗原结合位点分别是第一VHH和第二VHH，所述第一VHH和第二VHH的序列相同或者不同，且结合相同或者不同的抗原表位。

5.根据权利要求1－4中任一项所述的三链抗体，其中第一多肽链从N端至C端包含第一重链可变结构域、免疫球蛋白CH1结构域和Fc结构域；第二多肽链从N端至C端包含第一轻链可变结构域和免疫球蛋白CL结构域；且第三多肽链从N端至C端包含单结构域第二抗原结合位点、单结构域第三抗原结合位点和Fc结构域，优选地，所述免疫球蛋白是IgG1、IgG2或IgG4免疫球蛋白，更优选地，所述免疫球蛋白是人IgG1免疫球蛋白。

6.根据权利要求5所述的三链抗体，其中所述第一多肽链和第三多肽链的Fc结构域包含免疫球蛋白恒定部分的铰链区，并且所述第一多肽链和第三多肽链彼此通过所述铰链区处的二硫键稳定缔合，例如，在所述三链抗体的第一多肽链和第三多肽链的Fc结构域中包含具有“CPPC”氨基酸残基的铰链区，从而所述第一多肽链和第三多肽链彼此通过所述铰链区处氨基酸残基之间形成的二硫键稳定缔合；

优选地，所述第一多肽链和第三多肽链在各自的Fc结构域中还分别包含Y349C和S354C或者S354C和Y349C(根据Kabat的“EU编号”)，从而所述第一多肽链和第三多肽链在Fc区进一步形成链间二硫键。

7.根据权利要求5或6所述的三链抗体，其中所述第一多肽链和/或第三多肽链在Fc结构域中包含影响抗体效应子功能的突变，例如，LALA突变。

8.根据权利要求5－7中任一项所述的三链抗体，其中所述第一多肽链和第三多肽链在各自的Fc结构域中分别包含凸起或空穴，并且第一多肽链Fc结构域中的所述凸起或空穴可分别置于第三多肽链Fc结构域中的所述空穴或凸起中，由此所述第一多肽链和第三多肽链彼此形成“结入扣”的稳定缔合。

9.根据权利要求2－8中任一项所述的三链抗体，其中所述免疫球蛋白CH1结构域和CL结构域中分别包含凸起或空穴，并且CH1结构域中的所述凸起或空穴可分别置于CL结构域中的所述空穴或凸起中，由此所述第一多肽链和第二多肽链彼此形成“结入扣”的稳定缔合。