[发明专利]人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的GluN1/GluN2A四聚体的表达及其应用

权利要求书

1.人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的突变体，其特征在于，其包括选自下组的亚单位突变体或其聚合体：

(a) 亚单位GluN1跨膜及胞外区突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1且第612位突变为精氨酸；

(b) 亚单位GluN2A跨膜及胞外区突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2且第656-657位突变为精氨酸；

(c) 包含(a)所述的亚单位GluN1跨膜及胞外区突变体和(b)所述的亚单位GluN2A跨膜及胞外区突变体的聚合体。

2.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述的聚合体为四聚体。

3.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述的聚合体为两个GluN1亚单位突变体、两个GluN2A亚单位突变体构成的四聚体。

4.分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求1～3任一所述的突变体。

5.一种表达构建体或载体，其特征在于，它含有权利要求4所述的多核苷酸。

6.如权利要求5所述的表达构建体或载体，其特征在于，所述的载体为适合真核细胞表达的杆状病毒载体。

7.如权利要求5所述的表达构建体或载体，其特征在于，其含有权利要求4所述的多核苷酸，以及与之操作性连接的：3C蛋白酶编码基因，报告基因，和/或纯化标签编码基因。

8.如权利要求7所述的表达构建体或载体，其特征在于，所述的3C蛋白酶编码基因位于权利要求4所述的多核苷酸的3’端。

9.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求5～8任一所述的载体，或基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。

10.如权利要求9所述的宿主细胞，其特征在于，所述的细胞为能被杆状病毒感染且表达外源蛋白的细胞。

11. 一种生产权利要求1～3任一所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的突变体的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)培养权利要求9或10所述的宿主细胞，获得培养物；和

(2)从培养物中分离权利要求1～3任一所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的突变体。

12.权利要求1所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的突变体的用途，用于作为抗原，特异性检测抗人源N-甲基-D-天冬氨酸抗体，所述用途为非疾病诊断性用途；或，用于制备诊断抗NMDA受体抗体阳性相关疾病的试剂或试剂盒；所述疾病为脑炎。

13. 一种提高重组的人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的稳定性及表达量的方法，其特征在于，所述方法包括：获得野生型人源N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位GluN1跨膜及胞外区、其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1，将其第612位突变为精氨酸；以及获得野生型人源N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位GluN2A跨膜及胞外区、其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2，将其第656-657位突变为精氨酸。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，还包括：使该两个亚单位形成聚合体。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述聚合体为四聚体。

16. 一种用于特异性检测抗人源N-甲基-D-天冬氨酸抗体或用于诊断抗NMDA受体抗体阳性相关疾病的试剂盒，其特征在于，其中包含：

权利要求1～3任一所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的突变体；或

权利要求4所述的多核苷酸；或

权利要求5～8任一所述的表达构建体或载体；或

权利要求9或10所述的宿主细胞。