[发明专利]一种ATP多位点结合荧光增强型探针分子及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种ATP荧光分子探针的制备方法，其特征在于，步骤如下：

(1)在反应容器中，将罗丹明衍生物加入到无水乙醇中搅拌至完全溶解，然后滴加多胺类化合物，在76-90℃下搅拌回流至少24h，溶液颜色变淡或至无色，反应结束，冷却到室温后旋蒸除去溶剂，然后加入水和二氯甲烷萃取洗涤，收集有机相，旋蒸除去溶剂，用体积比6:0.2～6:0.8的二氯甲烷和乙醇混合液过柱色谱分离提纯，得到含氨基的罗丹明衍生物中间体Rh-NH₂；

所述的罗丹明衍生物为罗丹明B或罗丹明6G；

所述的多胺类化合物为乙二胺、二乙烯三胺或三乙烯四胺；

罗丹明衍生物和多胺基化合物的摩尔比为＝1：10-20；

(2)将步骤(1)得到的产物Rh-NH₂与含醛基的苯硼酸在无水乙醇中于76-90℃回流反应至少10h，冷却到室温后旋蒸除去溶剂，然后用乙醚洗涤沉淀、离心、干燥，得到含仲胺链段和苯硼酸修饰的罗丹明衍生物的ATP荧光探针；

步骤(2)中，Rh-NH₂、含醛基的苯硼酸和无水乙醇的用量比例为0.5mmol：0.5mmol：(8-16)mL；

所述的含醛基的苯硼酸化合物为邻醛基苯硼酸或对醛基苯硼酸；

所述ATP荧光探针，其结构通式如下：

或

其中，n＝0或1或2，R₁＝B(OH)₂或H，R₂＝B(OH)₂或H，R₁和R₂不同。

2.权利要求1制备所得的ATP荧光分子探针在选择性识别ATP中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述ATP荧光分子探针在选择性识别ATP时，不受AMP、SDP、GTP、GMP、ADS、CTP、H₂PO₄^-、HPO₄^2-、Cl^-、PO₄^3-、NO₃^-、SO₄²和/或CO₃^2-的干扰。

4.权利要求1制备所得的ATP荧光分子探针在活细胞线粒体标记中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述活细胞为A375细胞。

6.权利要求1制备所得的ATP荧光分子探针在实时监测活细胞线粒体ATP浓度变化的荧光成像中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述活细胞为A375细胞。