[发明专利]一种免前处理自动化提取大体积全血DNA的方法在审
| 申请号： | 201811529488.1 | 申请日： | 2018-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN109355287A | 公开（公告）日： | 2019-02-19 |
| 发明（设计）人： | 董涛;梁经纶;王凌云 | 申请（专利权）人： | 长春市志昂生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 长春众益专利商标事务所(普通合伙) 22211 | 代理人： | 余岩 |
| 地址： | 130000 吉林省长春市朝阳区高新北*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 磁性微球 全血 白细胞 前处理 吸附 自动化 裂解 红细胞 白细胞裂解液 磁性纳米微球 红细胞裂解液 磷酸钾缓冲液 聚乙烯亚胺 体积百分比 提取DNA 封闭液 活化剂 磷酸钠 活化 交联 微球 羧基 制备 悬浮 释放 封闭 | ||
1.一种免前处理自动化提取大体积全血DNA的方法，其特征在于包括下列步骤：
1）制备一种能够吸附白细胞的磁性微球A
使用活化剂将羧基磁性纳米微球活化，再用含1～10%质量体积百分比浓度的聚乙烯亚胺的10～50mmol/L pH8.0～9.0的磷酸钠或磷酸钾缓冲液交联，然后用封闭液封闭，最后，将微球悬浮于10～50mmol/L pH8.0～9.0的缓冲液中，即得磁性微球A；
2） 从大体积全血中提取DNA
2.1）使用红细胞裂解液裂解红细胞，其过程中同时用磁性微球A吸附白细胞；
2.2）使用白细胞裂解液裂解吸附在磁性微球A上的白细胞，并将释放的DNA用磁性微球B提取出来。
2.根据权利要求1所述的一种免前处理自动化提取大体积全血DNA的方法，其特征在于：所述羧基磁性纳米微球为表面修饰羧基的磁性微球B。
3.根据权利要求1所述的一种免前处理自动化提取大体积全血DNA的方法，其特征在于：所述红细胞裂解液能够裂解红细胞，并促进白细胞吸附于磁性微球A，其包含促进白细胞吸附于磁性微球A的5～30%质量体积百分比浓度的聚乙烯吡咯烷酮，还包含但不限于0.5～5% 质量体积百分比浓度的曲拉通或吐温、1～10mmol／L氯化镁或硫酸镁，以及调节pH在8.0～9.0范围的10～100mmol／L缓冲液。
4.根据权利要求1所述的一种免前处理自动化提取大体积全血DNA的方法，其特征在于：所述白细胞裂解液能够使吸附于磁性微球A表面的白细胞在加热条件下裂解从而释放DNA，并且促进释放的DNA吸附于磁性微球B，其包含但不限于1～10%质量体积百分比浓度的表面活性剂、2～8mol/L变性剂、10～50mmol/L EDTA，以及调节pH在7.5～8.5范围的10～100mmol／L缓冲液。
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