[发明专利]人β地中海贫血基因分型检测的试剂及检测方法

权利要求书

1.一种人β地中海贫血基因分型检测的试剂，其特征在于，所述试剂包括：

针对β^IVSⅡ654基因位点的第一对引物和第一单位点探针；

针对β^CD-17基因位点的第二对引物和第二单位点探针；

针对β^-28基因位点的第三对引物和第三单位点探针；

针对β^CD41-42基因位点的第四对引物和第四单位点探针；

针对β^CD-71-72基因位点的第五对引物和第五单位点探针；

针对β^CD-26基因位点的第六对引物和第六单位点探针；

其中，所述第一引物对的核酸序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，所述第一单位点探针的核酸序列为SEQ ID NO：5；

所述第二引物对的核酸序列为SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7，所述第二单位点探针的核酸序列为SEQ ID NO：10；

所述第三引物对的核酸序列为SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12，所述第三单位点探针的核酸序列为SEQ ID NO：15；

所述第四引物对的核酸序列为SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17，所述第四单位点探针的核酸序列为SEQ ID NO：20；

所述第五引物对的核酸序列为SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22，所述第五单位点探针的核酸序列为SEQ ID NO：25；

所述第六引物对的核酸序列为SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：27，所述第六单位点探针的核酸序列为SEQ ID NO：30；

其中，所述第一单位点探针、第二单位点探针、第三单位点探针、第四单位点探针、第五单位点探针、第六单位点探针的5'端均连接有荧光报告分子，且3'端均连接有猝灭剂。

2.如权利要求1所述的人β地中海贫血基因分型检测的试剂，其特征在于，所述荧光报告分子包括FAM、HEX、Texas Red和Cy5中的至少一种。

3.如权利要求1所述的人β地中海贫血基因分型检测的试剂，其特征在于，所述猝灭剂包括BHQ1、BHQ2和Dabcyl中的至少一种。

4.如权利要求1～3任一项所述的人β地中海贫血基因分型检测的试剂，其特征在于，所述试剂进行检测时，6个位点用a孔和b孔两个孔检测，每个孔加一个内参基因。

5.如权利要求4所述的人β地中海贫血基因分型检测的试剂，其特征在于，所述的a孔中包括针对a孔的内参基因a的第七对引物和第七单位点探针；所述b孔中包括针对b孔的内参基因b的第八对引物和第八单位点探针。

6.如权利要求5所述的人β地中海贫血基因分型检测的试剂，其特征在于，所述第七引物对的核酸序列为SEQ ID NO：31和SEQ ID NO：32，所述第七单位点探针的核酸序列为SEQID NO：35；

所述第八引物对的核酸序列为SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：37，所述第八单位点探针的核酸序列为SEQ ID NO：40。

7.一种人β地中海贫血基因分型的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取待测DNA；

将所述待测DNA与PCR试剂、权利要求1-6任一项所述的试剂混合，进行多重不对称荧光定量PCR扩增，得到熔解曲线的Tm值；

根据所述Tm值，判断所述待测DNA中的β^IVSⅡ654、β^CD-17、β^-28、β^CD41-42、β^CD-71-72、β^CD-26的基因型。

8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述待测DNA来自人的全血、口腔上皮细胞、唾液、皮肤和头发中任一种的全基因组。