[发明专利]解卷积等量异位报告离子比率

说明书

一种方法包括将不同的等量异位标签施加至多个样品中的每一个；组合所述样品；在组合的样品内实行物种分离；隔离和碎裂在一定m/z范围内的标记的母离子以产生多个报告离子，每个报告离子对应于所述等量异位标签之一；测定在沿峰的多个点处所述多个报告离子和代表母物种的离子的强度；并且拟合在所述多个点处所述代表母物种的离子和所述多个报告离子的强度，以获得所述多个样品中的每一个中所述母物种的相对丰度。

技术领域

本公开大体上涉及包括解卷积等量异位报告离子比率的质谱领域。

背景技术

质谱法越来越多地被用于蛋白质和肽的定量，部分原因在于它能够以高分辨率和低检测限同时分析样品中的多种蛋白质。在许多蛋白质组学研究中，需要分析大量样品，每个样品都含有许多个别蛋白质或肽。这种大规模研究促使研究人员开发用以增加在给定时间段内能够分析的样品数量的策略。增加样品处理量的一种策略是多路复用，其中在质谱仪中组合若干样品并一起测试。通过多路复用，每个肽样品可以使用独特的化学标记，使得质谱中的特定峰可以与特定样品相关联。

等量异位标签(isobaric tag)是可用于肽的多路复用分析的一类化学标记。市售等量异位标签的一些实例是TMT(串联质量标签试剂(Tandem Mass Tag Reagents)；ThermoScientific,Pierce Protein Research Product))和iTRAQ(等量异位素标记相对与绝对定量(Isobaric Tagging Relative Absolute Quantitation)，SCIEX)。一组等量异位标签可以具有两种或更多种类型，其中每种类型包含在该组内具有独特质量的报告部分。尽管这些报告部分具有不同的质量，但是等量异位标签包括质量归一化部分，使得该组中的每种类型标签的总质量相同。等量异位标签可以共价连接到分析物上以形成标签标记的分析物。接下来，可以使用串联质谱法(例如MS2)使标签标记的分析物碎裂以使报告离子释放。报告离子的丰度由获得的产物离子谱测定。每种类型的报告离子的相对丰度对应于样品中特定肽的丰度。

例如，在具有四种不同样品的多路复用研究中，这些样品各自可以用具有独特报告部分的等量异位标签标记。所有标签标记的分析物都可以在质谱仪中共隔离，因为它们具有相同的m/z值并且在所述过程中与具有不同m/z值的其它离子分离。接下来，可以使隔离的离子碎裂，使得报告离子从分析物裂解。然后，可以用质谱仪分析裂解的报告离子。此处，应测量与这四种类型的报告部分相关的四个质谱峰。然后，可以将报告部分的丰度值与每个样品的相对肽浓度相关联。

数据非依赖型采集(DIA)的使用正在缓慢增长，这是因为此方法简单，并且相信它可以提供样品或系统的非常完整的图像，而且数据质量因仪器的进步而得到改善。然而，DIA的一个很大的缺点是与样品多路复用存在认知不兼容。在某些情况下，由于存在干扰物种，由等量异位素标记技术测定的肽定量的准确性可能会受到影响。使用来自DIA隔离窗内并且还存在色谱重叠的组分的等量异位标签(TMT或iTRAQ)将产生失真的比率。在这种情况下，离子隔离步骤可包括两种或更多种标签标记的分析物物种，它们同时在质量隔离窗和色谱隔离窗内。结果是，两种或更多种标签标记的分析物可产生报告基团信号，并由此使相关肽的丰度测量不准确。应该注意的是，报告部分在从肽裂解后，就变成无特征的(anonymous)(即，形成它的前体离子的属性就会丧失)。因此，随后不能处理裂解的报告离子强度信号以消除干扰性共隔离的离子的影响。这意味着每个样品必须连续地注射，使得大型研究的采集时间非常长。因此，仍然需要改进的标记技术，这些标记技术可提高质谱法定量肽的准确度，尤其是在DIA的背景下。

发明内容

在第一方面，一种方法可以包括将不同的等量异位标签施加至多个样品中的每一个；组合样品；在所述组合的样品内实行物种分离；隔离和碎裂在一定m/z范围内的标记的母离子以产生多个报告离子，每个报告离子对应于所述等量异位标签之一；测定在沿峰的多个点处所述多个报告离子和代表母物种的离子的强度；并且拟合在所述多个点处所述代表母物种的离子和所述多个报告离子的强度，以获得所述多个样品中的每一个中所述母物种的相对丰度。