[发明专利]一种快速恢复Steinernema longicaudum感染期幼虫的方法

说明书

本发明公开了一种快速恢复Steinernema longicaudum感染期幼虫的方法。将S.longicaudum感染期幼虫接种到人工卵液中，感染期幼虫恢复，收集恢复的线虫；所述的人工卵液含有柞蚕蛹血淋巴、海藻糖、鸡蛋黄、脱脂奶粉、N’s盐溶液和水。S.longicaudum感染期幼虫在人工卵液中恢复最快，且比例最高，1d后恢复率已接近68％，因此可以应用本发明的方法快速高效的恢复S.longicaudum感染期幼虫，从而为高效快速的培养S.longicaudum线虫提供条件。

技术领域

本发明属于昆虫病原线虫培养领域，具体涉及一种快速恢复Steinernemalongicaudum感染期幼虫的方法。

背景技术

昆虫病原斯氏属Steinernema和异小杆属Heterorhabditis线虫是国际上新型的高效生物杀虫剂(Georgis et al.，2006)，从二十世纪30年代开始就被用于害虫的防治(Smart，1995)，具有杀虫能力强，杀虫谱广，能主动搜索寄主，对人畜、环境安全等优点，易于大量培养及配制产品，并能与多种化学农药混用，对钻蛀及地下害虫有特效(Kaya andGaugler 1993；Grewal et al.，2005；Georgis et al.，2006；Yan et al.，2013；颜珣等，2014)。

昆虫病原线虫的生活史起始于感染期幼虫(Infectivejuveniles，IJ)携带共生细菌进入寄主昆虫体内，感染期幼虫避开昆虫的免疫反应，在昆虫血淋巴内释放共生细菌(Dowds and Peters，2002)。共生细菌在昆虫血淋巴内增殖，杀死寄主昆虫，线虫取食共生细菌以繁殖。当昆虫体内营养耗尽，3龄耐受态感染期幼虫形成，在外界环境足够湿润且温度适宜时，感染期幼虫携带共生细菌离开寄主昆虫(Brown and Gaugler，1997)，搜寻新的寄主。感染期幼虫是昆虫病原线虫生活史中唯一能自由存活的龄期，可使用普通的喷雾器进行施用以防治害虫。感染期幼虫能存活1到多个月，可进行产业化培养(Wright et al.，2005)。

感染期幼虫的恢复是液体培养流程中的关键。如果恢复率低，第一代成虫数量少，仅有少部分的共生细菌被取食，第一代成虫的后代则会因为营养充足不能发育成感染期幼虫，而形成成虫。由于此时培养液中的共生细菌质量较差，第二代成虫难以产生后代，所以这个具有两代成虫的培养过程中的感染期幼虫产量会比仅有一代成虫的培养过程中的感染期幼虫产量低(Hirao and Ehlers，2010)，培养时间长，收获时培养液中有高比例的其他龄期的线虫，会缩短最终线虫产品的货架时间。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速恢复S.longicaudum感染期幼虫的方法。

本发明的快速恢复S.longicaudum感染期幼虫的方法，包括以下步骤：

将S.longicaudum感染期幼虫接种到人工卵液中，感染期幼虫恢复，收集恢复的线虫；

所述的人工卵液含有柞蚕蛹血淋巴、海藻糖、鸡蛋黄、脱脂奶粉、N’s盐溶液和水。

优选，所述的人工卵液每9ml是通过以下制备方法制备的：将柞蚕蛹血淋巴3ml，无水海藻糖0.1g，鸡蛋黄2.5ml，脱脂奶粉0.1g，N’s盐溶液1ml和无菌水2.5ml混合均匀，所述的N’s盐溶液是每升含有NaCl 7.5g，KCl 0.1g，CaCl₂0.2g，NaHCO₃0.2g，余量为水。

所述的S.longicaudum感染期幼虫是S.longicaudum X-7感染期幼虫。

恢复的感染期幼虫可以接种到液体或固体培养基中继续培养，从而可以获得商品化的S.longicaudum感染期幼虫。