[发明专利]一种重组金黄色葡萄球菌A蛋白及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种重组金黄色葡萄球菌A蛋白及其制备方法与应用，属于生物技术领域。重组金黄色葡萄球菌A蛋白即在天然金黄色葡萄球菌A蛋白的N端加了一个短肽YJ后得到的重组蛋白，所述短肽YJ氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供一种重组金黄色葡萄球菌A蛋白基因，命名为yj‑rspa基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。与现有技术相比，本发明优化后的基因在原核表达体系中表达量显著提高，对YJ‑rSPA的产业化生产以及今后在生物医药领域抗体处理材料的应用具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种重组金黄色葡萄球菌A蛋白及其制备方法与应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。早在1940年，Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中，含有一种物质，在双向扩散试验中能与正常人血清形成沉淀。Jensen也发现类似现象，并将其命名为A抗原。

直到1963年Lofkvist等分离了该抗原，并证明它是一种蛋白质。

天然金黄色葡萄球菌SPA，相对分子质量为42kD，含有16种氨基酸，不含半胱氨酸，所以无二硫键。存在于大多数金黄色葡萄球菌细胞壁中，占整个细胞壁蛋白的6％左右,通过胞壁肤聚糖以共价键与之结合。A蛋白只具有一条肤链，不具有复杂的高级结构。其与IgG结合的功能域主要是由五个高度同源的E、D、A、B、C功能域组成，含有291个氨基酸，其中以B结构域与IgG结合的能力最强。

SPA因为其具有与抗体分子(尤其是IGg亚型)特异性结合的活性基团，所以在免疫检测试剂、诊断试剂盒等科研试剂、免疫吸附材料医疗器械、抗体纯化分离制备等领域有重要的应用价值。SPA作为活性原料添加在试剂、吸附材料到医疗器械等，本身也具有较大的市场价值。因此，SPA规模化制备及其后期的应用至关重要，目前利用原核系统表达重组A蛋白的主要弊端是表达量较低，包涵体的形成、生物活性不高等，真核表达重组A蛋白周期长，操作繁琐，成本高等缺点很难规模化生产。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种重组金黄色葡萄球菌A蛋白及其制备方法与应用。

本发明对金黄色葡萄球菌A蛋白基因结构进行优化，具体而言，本发明通过将YJ短肽与SPA连接制备重组金黄色葡萄球菌A蛋白(YJ-rSPA)，构建原核表达载体pET系列-yj-rspa使其在大肠杆菌宿主中能够得到高水平的表达，提高稳定性，提高活性。对YJ-rSPA产业化生产及其应用具有重要意义。

本发明在SPA的N端加了一个短肽YJ(并通过原核优化)，能够在大肠杆菌稳定高表达，提高了A蛋白的产量及活性，为A蛋白产业化生产及其应用奠定了理论和实践基础。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明提供一种重组金黄色葡萄球菌A蛋白，在天然金黄色葡萄球菌A蛋白的N端加了一个短肽YJ后得到的重组蛋白，所述短肽YJ氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的重组金黄色葡萄球菌A蛋白，保留了部分天然的SPA活性结构区域，因此，蛋白的活性部分没有损失，能够保持更好活性，YJ活性肽增加了表达量、稳定性和活性。重组金黄色葡萄球菌A蛋白能够提高表达效率，抗体特异结合作用等活性。

短肽YJ氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，含有有21个氨基酸，主要是非极性氨基酸，极性氨基酸比率不到18％。加在SPA的N端，能够提高SPA的表达，以及增强表达后的活性和稳定性。

短肽YJ对应的核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明提供一种重组金黄色葡萄球菌A蛋白基因，命名为yj-rspa基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。