[发明专利]OBR基因及用作溆浦鹅肥肝脂肪沉积相关遗传标记的方法

说明书

本发明公开了一种OBR基因及作用溆浦鹅肝脏脂肪沉积相关遗传标记的方法，利用瘦蛋白受体基因OBR及其作为溆浦鹅肥肝性状的遗传标记，通过测定溆浦鹅肥肝大小，并筛选溆浦鹅OBR基因多态性，然后将OBR基因多态性与肥肝性状关联分析，其OBR分子标记的序列如SEQ ID NO:1所示。在SEQ ID NO:1的573bp处存在一个G/A碱基突变，GG基因型溆浦鹅肝脏大小显著高于GA基因型个体。本发明为溆浦鹅肥肝性状的标记辅助选择提供了分子标记。

技术领域

本发明属于家禽分子生物技术及育种领域，主要是测定溆浦鹅肥肝性状相关的遗传标记，具体地说是，是测定OBR基因中的多态性，即与溆浦鹅肥肝性状相关的瘦蛋白受体基因的单核苷酸多态性(Singlenucleotide polymorphism，缩写为SNP)的存在。

技术背景

溆浦鹅是我国肥肝性能最优，体型大，生长快，抗病性强，优势特别明显的国家级地方品种遗传资源，2014年进入国家级畜禽遗传资源保护名录。鹅肥肝是世界级高档美味健康食品中三大珍品之一，其所富含的不饱和脂肪酸、亚油酸、卵磷脂等对软化血管、降低血脂、预防心脑血管疾病的发生具有重要保健作用。由于溆浦鹅缺乏科学系统选育，导致填肥后肝脏大小个体差异大，严重制约了鹅产业化生产效率、产品品质和经济效益。常规选育较慢，随着生物分子技术的发展，使得我们能够从DNA水平寻找与溆浦鹅肥肝性状相关的主效基因或分子标记，并在育种中将其应用于标记辅助选择，一提高选育进程，获得更大的经济效应。

瘦蛋白受体(Leptin receptor,OBR)是一种跨膜蛋白，属于I类细胞因子超家族受体，有5种异构体，即OBRa、OBRb、OBRe、OBRd和OBRf。它们具有相同的胞外区，而胞内结构域则具有长度和序列上的差异。OBR主要生理功能是与瘦素结合，使瘦素发挥调节体内能量平衡、脂肪贮存等生理作用。有关家禽OBR基因的研究很少，Guy等首次克隆了鸡OBR cDNA序列，与哺乳动物的同源性平均为60％。Dunn等将鸡的OBR基因定位在8号染色体上。顾志良等在OBR基因外显子9上检测到了1个碱基突变，并推测等位基因A可能与沉积较多腹脂有关。王颖等在鸡OBR基因内含子8上检测到了T—C、G—A 2个基因突变，产生的不同基因型在腹脂重和腹脂率上差异显著，BB型个体腹脂重和腹脂率显著高于AB型个体，极显著高于AA型个体。初步推断OBR基因可能是影响鸡脂肪性状的主效基因或与主效基因紧密连锁

目前，关于OBR基因多态性与肥肝性能的关联分析相对较少。溆浦鹅DNA遗传标记、遗传多样性和相关功能基因的研究仍处于起步阶段，关于溆浦鹅肥肝脂肪沉积相关的遗传标记尚未见报道。

发明内容

针对上述现有技术的不足，提供一种OBR基因及其作为溆浦鹅肥肝性状遗传标记的用途；同时筛选与溆浦鹅肥肝性状相关的SNP，以期应用于标记辅助选择或标记辅助渗入，并提供上述遗传标记在溆浦鹅标记辅助选择中的应用。

本发明实施例是这样实现的，一种OBR基因，所述基因为与表示溆浦鹅肥肝性状相关的基因，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所述。序列表SEQ ID NO:1的573bp处有1个G/A的碱基突变，导致多态性存在。所用引物如下：

正向引物：5’—TTTGCCGTTAGTACCAGG—3’

反向引物：5’—GCACAGACAAACAGGAGC—3’

本发明实施例的另一目的在于提供一种用OBR基因作为溆浦鹅溆浦鹅肥肝性状相关遗传标记的方法，包括如下步骤：

(1)根据GenBank中鹅OBR基因的序列，用Primer 5.0设计引物，覆盖该基因全部外显子14到外显子16序列；

(2)以溆浦鹅基因组DNA为模板，PCR扩增，产物纯化，克隆，获得如序列表SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列；