[发明专利]感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建及病情判断方法

说明书

本发明公开了一种感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建及病情判断的方法，尤其采用大肠杆菌建立小鼠菌血症疾病模型，通过建立观察的症状与体内血液降钙素原之间的关系，首次创新的将小鼠菌血症疾病发展程度科学的分为6级，以便于判断菌血症动物疾病模型的疾病发展程度，为疾病的发展、治疗药物的筛选及疗效的科学评价打下较好的构建模型基础。采用该方法可以较好科学、快速、准确的判断出小鼠发病的严重程度及治疗情况，较好的补充了仅仅以死亡率作为模型构建指标及判断筛选药物疗效不够敏感和准确的弊端，该模型的建立方法为为治疗菌血症的药物筛选模型成功构建提供了一种便捷、快速、准确的判断方法。

技术领域

本发明属于大肠杆菌引起的菌血症感染治疗技术领域，尤其涉及一种感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建及病情判断方法。

背景技术

菌血症是指外界的细菌经由体表的入口或是感染的入口进入血液系统后，在机体血液内繁殖并随血流在全身播散，是机体感染的严重炎症反应，是全球重症监护病房的发病率和死亡率的主要原因；也是我国乃至全世界急危重症领域普遍面临的难题。在耐药性细菌增多的大环境下，无疑对ICU病房来讲更是雪上加霜，在许多文献报道医院所有败血症发生的案例中，因耐药大肠杆菌感染而引起的菌血症竟占40％以上，尤其是因产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBL)耐药大肠杆菌导致的菌血症死亡率更高。大肠杆菌是常见的条件致病菌，也是常发的一种疾病，它可原发引起鸡急性败血症、腹膜炎、肝炎、肺炎、肠炎等多部位严重全身感染，亦可继发或混发于病毒病，给养殖业造成巨大的经济损失。阿莫西林、氨苄西林、头孢噻呋、头孢曲松、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦等β-内酰胺环类抗生素是防治该病的常用的重要药物，随着养殖规模集约化程度愈来愈大，用药愈来愈泛滥，其耐药菌株愈来愈多，关于大肠杆菌耐药性的报道也较多。研究证实，耐药的主要机制之一是产生β-内酰胺酶，尤其是超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)，该酶能较强和快速地水解β-内酰胺环，使这类抗生素丧失抗菌活性。ESBLs是β-内酰胺酶的最主要酶型，它不仅对头孢三代和氨曲南耐药，而且对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类呈交叉耐药，仅对碳青霉烯类、头霉烯类药物敏感。许多文献已经报道大肠杆菌的多重耐药性与产生ESBLs有密切关系，国内外对之较为关注。发明人最近开展了食品动物源致病菌ESBLs的检测、提取、酶对抗生素的水解率及舒巴坦、他唑巴坦以及中药的抑酶保护作用等研究，对部分ESBLs大肠杆菌的药敏试验表明，其多重耐药率明显高于非ESBLs菌株。细菌的耐药性造成养殖户治疗耐药菌引起的菌血症疾病时用药成本增加，治疗疗程延长，畜禽死亡率增加，给生产带来较大经济损失，并且增加畜禽药物残留风险。因此，实际生产中亟需建立一种败血症疾病模型，用于治疗败血症疾病的药物筛选和研发，感染耐药菌性败血症小鼠疾病模型的构建以及同时可以对病情进行科学判断方法,目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有构建模型及病情判断技术的不足,提供一种感染耐药性细菌败血症小鼠疾病模型的构建及病情判断的方法，具体技术方案如下：

一种感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建方法，包括以下步骤：

S1：临床收集患有大肠杆菌疾病畜禽的病料，划线接种于麦康凯筛选培养基，37℃过夜培养；

S2：挑取单个的菌落，继续分离培养；

S3：对S2培养的菌落革兰氏染色与镜检，初步确定为大肠杆菌；

S4：肠杆菌科的细菌生化鉴定管进行鉴定，确定分离细菌为大肠杆菌；

S5：用fosA3、CTX-M、TEM、SHV耐药基因的引物进行扩增，确定分离的耐药大肠杆菌的耐药基因型，再用小鼠回归实验确定其致病性；

S6：原菌液划麦康凯琼脂平板，挑选单个菌落，接种到液体培养基中过夜培养；

S7：测定每毫升的细菌数，并将其菌液稀释；

S8：选取18-22g小鼠10只，分为空白对照组和疾病模型构建组；