[发明专利]一种检测肝素结合性表皮生长因子的ELISA试剂盒

说明书

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测肝素结合性表皮生长因子的ELISA试剂盒。该试剂盒包括：预包被抗HB‑EGF蛋白单克隆抗体的96孔酶标板、辣根过氧化物酶（HRP）标记的HB‑EGF蛋白兔多克隆抗体、稀释液、洗涤液、显色液、终止液和HB‑EGF蛋白标准品。本发明制备的双抗体夹心法检测试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定量准确、简单易用、重现性好等特点，可检测细胞、血清、血浆和动物组织样品中HB‑EGF含量，可供基础研究和临床诊断中HB‑EGF蛋白的定性及定量检测，并可同时快速检测大批量样本，应用前景十分广阔。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测肝素结合性表皮生长因子的ELISA试剂盒。

背景技术

肝素结合表皮生长因子(Heparin-binding Epidermal Growth Factor,HB-EGF)，即HB-EGF蛋白。

近年来，大量研究结果提示，HB-EGF或可成为一个新的肿瘤标志物，有研究表明，部分乳腺癌和前列腺癌患者的HB-EGF表达水平与溶血磷脂酸-1(LPA-1，一种促肿瘤生长转移因子)的水平呈正相关，提示人们HB-EGF或可作为乳腺癌、卵巢癌及前列腺癌等多种癌症的诊断及临床监测的分子标志物。

HB-EGF作为多种肿瘤发生发展的重要的生物标志物，对其准确、快速的检测对肿瘤早期诊断、肿瘤发生发展机理的研究、发展分期的跟踪及临床治疗和预后情况判断的意义十分关键，故急需建立一种简便、高效、可用于对各类常见样本如细胞悬液、血清、血浆等的高通量快速检测的试剂和方法。

目前国内市售HB-EGF蛋白ELISA试剂盒存在特异性差，产量低等缺点，因此亟需开发高特异性、高亲和性的HB-EGF抗体及相关试剂盒的研制，支持国内HB-EGF蛋白的各项基础研究，并进一步研制临床体外诊断试剂盒提供关键材料，加速产品的开发，填补该技术领域的空白。

发明内容

本发明的目的是提供一种低成本、检测灵敏度高、检测结果稳定、重复性好的肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的双抗体夹心法ELISA试剂盒。

本发明采用的技术方案为：

一种用于检测肝素结合性表皮生长因子的ELISA试剂盒，所述试剂盒采用的是双抗体夹心法，所述试剂盒包括特异性的HB-EGF蛋白单克隆抗体、辣根过氧化物酶(HRP)标记的多克隆抗体。

所述单克隆抗体包括轻链可变区，其序列氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；还包括重链可变区，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

其中，所述的特异性的HB-EGF蛋白单克隆抗体用于包被；所述辣根过氧化物酶(HRP)标记的多克隆抗体用于HB-EGF蛋白检测。

其中所述HB-EGF单克隆抗体为鼠单克隆抗体；HRP标记的多克隆抗体为兔多克隆抗体。

所述用于检测肝素结合性表皮生长因子的ELISA试剂盒还包括样品稀释液、洗涤液、底物显色液、反应终止液及HB-EGF蛋白的标准品；

所述样品稀释液为含有0.5％牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液(PBS)；所述洗涤液为含有0.1％吐温-20(Tween-20)的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)；所述底物显示液由显色液A和显色液B组成，显色液A为过氧化氢，显色液B为四甲基联苯胺，显色液使用时取等体积的A、B液混匀；所述终止液为2mol/L的硫酸，所述HB-EGF蛋白标准品为重组HB-EGF蛋白。

所述鼠单克隆抗体由重组HB-EGF蛋白免疫BALB/c鼠后，利用杂交瘤技术制备获得；所述HRP标记的兔多克隆抗体由重组HB-EGF蛋白免疫新西兰白兔，通过硫酸铵法纯化技术获得；按常规方法利用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记抗体获得HRP标记的兔多克隆抗体，用于HB-EGF蛋白检测。