[发明专利]内胚层干细胞规模化制备功能性肝母细胞与肝实质细胞的方法及其应用

权利要求书

1.一种诱导人类内胚层干细胞分化为肝母细胞和/或肝实质细胞的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在第一培养条件下，在培养体系中培养内胚层干细胞，从而获得经肝脏特化的肝向内胚层(Hepatic Endoderm)细胞；其中，所述培养体系包括bFGF、VEGF、EGF、和BMP4因子；

(b)在适合培养的条件下，在培养体系中培养步骤(a)获得的肝向内胚层(HepaticEndoderm)细胞，从而获得肝母细胞；和

(c)在第二培养条件下，在培养体系中培养步骤(b)获得的肝母细胞，从而获得肝实质细胞；其中，所述培养体系包括HGF、OSM、Dex、Compound E、和/或A83。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述培养体系为含有第二培养基和添加物的培养液，所述添加物包括bFGF、VEGF、EGF、HGF、OSM、和Dex因子。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(a)－(c)中，所述培养体系中还含有促进分化的其他物质，选自下组：基质胶(Matrigel)、层粘连蛋白(Laminin)、基底膜提取物(Basement Membrane Extracts)、或其组合。

4.一种肝母细胞，其特征在于，所述肝母细胞为封闭的具有中空结构的单层细胞球囊，其中，所述肝母细胞的球囊直径大小300－500μm，球囊表面肝母细胞大小60-80μm，细胞层厚度6－12μm。

5.一种肝实质细胞，其特征在于，所述肝实质细胞为封闭的具有中空结构的单层细胞球囊，其中，所述肝实质细胞的球囊直径大小300－500μm，球囊表面肝实质细胞大小80-100μm，细胞层厚度8－15μm。

6.一种权利要求4所述肝母细胞或权利要求5所述的肝实质细胞的用途，其特征在于，用于制备治疗肝脏相关疾病的药物组合物。

7.一种组合物，其特征在于，所述药物组合物含有权利要求4所述的肝母细胞和/或权利要求5所述的肝实质细胞。

8.一种诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基含有基础培养基和添加物；其中所述基础培养基选自下组：SFD、DMEM、DMEM/F12、HCM、或其组合；并且，所述添加物包括HGF、OSM、Dex、Compound E、和/或A83。

9.一种诱导组合物，其特征在于，包括：

(a)第一诱导因子，所述第一诱导因子包括bFGF、VEGF、EGF、和BMP4因子；

(b)第二诱导因子，所述第二诱导因子包括bFGF、VEGF、EGF、HGF、OSM、和Dex因子；

(c)第三诱导因子，所述第三诱导因子包括HGF、OSM、Dex、Compound E、和/或A83；和

(d)促进分化的其他物质，所述促进分化的其他物质选自下组：基质胶(Matrigel)、层粘连蛋白(Laminin)、基底膜提取物(Basement Membrane Extracts)、或其组合。

10.权利要求9所述的诱导组合物的用途，其特征在于，用于诱导内胚层干细胞分化为肝母细胞和/或肝实质细胞。