[发明专利]抗对虾白斑病疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种抗对虾白斑病疫苗，其活性成分为如SEQ ID NO.1所示的蛋白，具体的，可以为含有能够表达SEQ ID NO.1所示的蛋白的重组工程菌的培养物，其制备方法为：(1)将如SEQ ID NO.2所示的合成基因Y1798G与空白载体连接获得重组载体；(2)将上述重组载体导入宿主，挑选转化成功的转化子，扩大培养，所得培养物经过一定方法处理即为抗对虾白斑病疫苗。本发明的抗对虾白斑病疫苗，通过饲喂对虾即可达到预防对虾白斑病的目的，具有免疫活性高、效率高、实用价值高等优点。此种方法研制的口服疫苗不仅能针对对虾等水产生物，对于其它动物的口服疫苗的研制同样是一种有效的策略。

技术领域

本发明涉及一种抗对虾白斑病疫苗，及其制备方法，属于免疫技术领域。

背景技术

虾白斑综合症病毒(wssv)是对全球养殖对虾危害最大的病毒，毒力极强，感染宿主后致死率高达90～100％。对虾一般感染后48小时出现白斑，4天内死亡率达100％。这严重影响了对虾的产量以及对虾养殖用户的热情。WSSV除能感染大多数虾品种外，还能感染非对虾种类，如端足类、介形类、蟹类、龙虾类、桡足类、水蝇类等甲壳纲动物，这些动物中多数感染WSSV而不出现特殊病理症状，可在海洋生态系统充当WSSV传播的中间宿主，给对虾养殖和野生甲壳纲动物资源构成严重威胁，其疫情至今尚未得到有效控制。

现有技术中防治对虾白班症病毒通常采用治疗性疫苗，包括灭活疫苗和减毒疫苗，但都存在不少缺陷。相比之下，利用基因工程技术生产对虾白斑综合征病毒新疫苗是今后的研究的方向。利用基因工程技术所生产的疫苗包括亚单位疫苗、肽疫苗、DNA疫苗、活体重组疫苗等。

目前关于对虾白斑病症病毒的亚单位疫苗的研究主要集中在wssv的囊膜蛋白VP28，VP19和被膜蛋白VP26组成的单价抗原亚单位疫苗或双价抗原亚单位疫苗，而相关报道证明双价或多价抗原亚单位疫苗比单价抗原亚单位疫苗对白斑综合症病毒有更好的预防作用。

表位疫苗是近年来发展起来的一种新型疫苗，它是利用基因工程手段，体外表达或人工合成病原微生物的表位，将其作为一种疫苗使用，属于亚单位疫苗的范畴。抗原表位又称为抗原决定簇(AD)，抗原分子中抗原特异性的化学基团，它能够与T细胞抗原受体TCR或B细胞抗原受体BCR特异性结合，最终刺激机体的免疫反应。

发明内容

针对上述现有技术，鉴于目前国内外对WSSV疫苗的研究近况，融合申请人的研究，本发明提出了创新性的抗对虾白斑症病毒疫苗研发思路，即利用目前有研究证实与WSSV感染与致病力有关的重要决定因子囊膜蛋白VP28、VP19和被膜蛋白VP26，从这三种蛋白基因中筛选表位基因，利用基因工程手段，组成串联的表位基因，利用基因载体生产抗原表位蛋白，最终通过合适的渠道生产具有预防和治疗效应的疫苗。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种抗对虾白斑病疫苗，其活性成分为氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白：

MGPKKDSDSDTDKDTDDDDDTANDNDDEDKYKNRTSYPKRRQTKTIETHTDNIETIRNGKSDAQMKEENTSRKINITGMQMVPKINPSKAFVGSSNTSSYSGTETERGERSYNTPGLSDKDMKTAPRTDPAGTGAENSIKGNTMSSKDIKSSSSEDGAAFDEIKKK；如SEQ ID NO.1所示。

一种抗对虾白斑病疫苗的制备方法，包括以下步骤：

(1)将合成基因Y1798G(其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)与空白载体PET-32a连接获得重组载体；