[发明专利]利用组培苗叶片快速繁育大花绣球无尽夏的方法

权利要求书

1.一种利用组培苗叶片快速繁育大花绣球‘无尽夏’的方法，其特征在于，利用无菌组培苗叶片形成愈伤，通过愈伤分化不定芽途径快速繁育大花绣球‘无尽夏’，具体步骤如下：

A）剪取‘无尽夏’无菌组培苗顶生第三到第六个叶片，对叶片垂直于主脉切割一刀并去除叶柄和叶稍；

B）将叶片置于愈伤诱导培养基上，暗培养15～25天后进行光照培养；

C）光照培养40天后，将带愈伤的叶片转到愈伤增殖与不定芽诱导培养基上进行继代培养，40 天后形成丛生芽；

D）将丛生芽切分，转移到不定芽生长培养基上进行伸长生长，30 天后形成幼苗；

E）将幼苗切下，转移到成苗与生根培养基上，30 天后，幼苗发育成具有根、茎、叶的完整再生植株；

所述培养基配方如下：

愈伤诱导培养基：MS培养基中加入终浓度为3.0 mg/L的细胞分裂素N-(2-氯-4-吡啶基)-N’-苯基脲CPPU、终浓度为0.1 mg/L的生长素吲哚丁酸IBA、终浓度为30 mg/L的蔗糖；

愈伤增殖与不定芽诱导培养基：MS培养基中加入终浓度为1.0～2.25mg/L的细胞分裂素6-苄氨基嘌呤6-BA、终浓度为0.1 mg/L的生长素吲哚丁酸IBA、终浓度为30 g/L蔗糖；

不定芽生长培养基：MS培养基中加入终浓度为1.0 mg/L的细胞分裂素6-苄氨基嘌呤6-BA 、终浓度为0.1 mg/L的生长素吲哚丁酸IBA、终浓度为30 g/L蔗糖；

成苗与生根培养基：MS培养基中加入终浓度为0.5mg/L的细胞分裂素6-苄氨基嘌呤6-BA、终浓度为0.1 mg/L的生长素吲哚丁酸IBA、终浓度为30 g/L蔗糖；

上述培养基均以MS培养基为基础，它们均在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8。

2.根据权利要求1所述利用组培苗叶片快速繁育大花绣球‘无尽夏’的方法，其特征在于，所述光照培养是指，光照强度为1500 lx，光照时间为12 h/d；培养室温度为25±2℃。

3.根据权利要求1或2所述利用组培苗叶片快速繁育大花绣球‘无尽夏’的方法，其特征在于：步骤A所述‘无尽夏’无菌组培苗是这样获得的：剪取‘无尽夏’当年带有4~6个侧芽的新发枝条5~7cm，通过组织培养后获得‘无尽夏’无菌组培苗。

4.根据权利要求3所述利用组培苗叶片快速繁育大花绣球‘无尽夏’的方法，其特征在于：所述的组织培养是指：对剪取的新发枝条用洗衣粉水洗刷干净，流水冲洗2～3 小时，无菌条件下，先用70% 的酒精浸30秒；再用0.1%的HgCl₂消毒10 分钟，无菌水冲洗4～6次后，接种到MS固体培养基上；30天后将获得的无菌苗切成2 cm且含有2个侧芽的茎段转接到MS+6-BA 2.25 mg/L+IBA 0.1 mg/L培养基上进行增殖；30天后再将增殖的芽转接到MS+6-BA1.0mg/L+IBA 0.1 mg/L培养基上进行壮苗的全过程。