[发明专利]一种水角的组培方法及其在种质保存中的应用

说明书

本发明提供了一种水角的组培方法及其在种质保存中的应用，涉及植物组培技术领域。本发明所述方法，包括以下步骤：1)将消毒后的水角种子接种于萌发培养基上进行萌发，得水角萌发苗；2)将步骤1)得到的所述水角萌发苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得增殖苗；3)将步骤2)得到的所述增殖苗接种于生根培养基上进行生根培养，得组培苗。利用本发明所述方法，增殖率达1:5，生根率达95％，移栽成苗率为95％，且还能延长继代周期到1年以上。

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种水角的组培方法及其在种质保存中的应用。

背景技术

水角(Hydrocera triflora)为凤仙花科水角属单种属多年生水生草本植物，其花粉红色或淡黄色，花型漂亮，果实成熟时紫红色，是一种极具开发潜力的水生观赏植物。水角主要分布于东南亚国家，而我国仅在海南地区有分布。由于生境变化，其分布范围十分狭窄，《中国生物多样性红色名录—高等植物卷》(2013)已将水角列为地区灭绝。

另外，水生植物体内通气组织往往很发达，本身就容易带菌，而且其发达的通气组织在灭菌时消毒所用的药品极易残留其中，对植物细胞的存活和组织的生长会造成影响。

在植物分类学上，水角属是凤仙花属的姊妹群，其植株花瓣全部离生，果实为假浆果，适应水生生境。水角的这些原始特征对于研究凤仙花科的起源、花演化式样和适应性分化等具有重要的意义。凤仙花科凤仙花属植物在观赏园艺方面应用广泛，已有很多组培快繁的研究，但水角的组培快繁和离体保存研究仍未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种水角的组培方法及其在种质资源保存中的应用，可获得高增殖率和生根率的组培苗，并且延长水角离体保存时间。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种水角的组培方法，包括以下步骤：

1)将消毒后的水角种子接种于萌发培养基上进行萌发，得水角萌发苗；所述萌发培养基为MS培养基为基本培养基，还包括5～6.5g/L的琼脂，所述萌发培养基的pH值为5.5～6.2；

2)将步骤1)得到的所述水角萌发苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得增殖苗；所述增殖培养基以MS为基本培养基，还包括：0.06～0.15mg/L的TDZ，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述增殖培养基的pH值为5.5～6.2；

3)将步骤2)得到的所述增殖苗接种于生根培养基上进行生根培养，得组培苗；所述生根培养基以MS为基本培养基，还包括：0.25～0.7mg/L的IAA，1～2g/L的活性炭，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述生根培养基的pH值为5.5～6.2。

优选的，步骤1)所述消毒，包括：将种子放入已滴加2～3滴洗洁精的流动水中冲洗30～40min；用75％乙醇溶液进行表面消毒20～30s，用无菌水冲洗3～8遍；再用0.1％HgCl₂溶液进行消毒8～15min，用无菌水冲洗2～5遍。

优选的，步骤1)所述萌发，步骤2)所述增殖培养和步骤3)所述生根培养的温度独立的为23±2℃；光照强度独立的为20～40μmol/(m²·s)，光照时间独立的为10～14h/d。

优选的，步骤2)所述增殖培养时接种所述萌发苗的带芽茎段和茎尖。

优选的，当步骤3)所述组培苗生根3条以上、根长为2～3cm后，还包括炼苗和移栽。

优选的，所述炼苗的时间为3～5d。

优选的，所述移栽的基质为泥塘土。