[发明专利]一种樟疫霉菌的检测靶标Pcin100006及其专用检测引物和快速检测方法有效

专利信息
申请号: 201811547749.2 申请日: 2018-12-17
公开(公告)号: CN109439792B 公开(公告)日: 2019-08-20
发明(设计)人: 戴婷婷;焦彬彬;胡涛;徐月 申请(专利权)人: 南京林业大学
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
代理公司: 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 代理人: 邱兴天
地址: 210037 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 疫霉菌 检测 检测引物 快速检测 靶标 反向环引物 反向内引物 反向外引物 正向环引物 正向内引物 正向外引物 高灵敏度 恒温扩增 技术平台 特异性强 田间土壤 疫病防治 重要意义 农药 病原物 可用 侵染 病害
【权利要求书】:

1.樟疫霉菌的检测靶标Pcinn100006,其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的樟疫霉菌的检测靶标Pcinn100006,其编码的蛋白序列如SEQ IDNO.2所示。

3.权利要求1或2所述的检测靶标Pcinn100006在检测樟疫霉菌中的应用。

4.权利要求1所述的樟疫霉菌的检测靶标Pcinn100006的专用检测引物,其特征在于:由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、正向环引物LF和反向环引物LB组成;各引物序列具体如下:

FIP:5′- CGAAGGACGAGGTGAAGGTGGACGCCCATACATCACATACG-3′;

BIP:5′- AAGGCCGGCTACATGTACTCGTCTCGGGCAAGATGACTTC-3′;

F3:5′- GTTCTGCGCGATTTGGTTAG-3′;

B3:5′-GCGGATCTTCCGATCTGGTA-3′;

LF:5′-AACGTGACGCCGGCAACAA-3′;

LB:5′- TGTTGCCTCCGGGCTGT-3′。

5.权利要求4所述的专用引物在检测樟疫霉菌中的应用。

6.一种检测樟疫霉菌的试剂盒,其特征在于:含有检测溶液,所述的检测溶液至少包括:1)权利要求4所述的专用引物的溶液。

7.根据权利要求6所述的检测樟疫霉菌的试剂盒,其特征在于:所述的检测溶液还包括:2)LAMP反应溶剂;3)DNA合成酶;4)羟基萘酚蓝。

8.权利要求6或7所述的试剂盒在检测樟疫霉菌中的应用。

9.一种检测樟疫霉菌的方法,其特征在于:提取待检微生物的DNA,以提取的DNA为模板,采用权利要求4所述的专用引物或权利要求6所述的试剂盒,进行对应的LAMP检测反应;观察反应溶液颜色变化,天蓝色表示检测为阳性,待检微生物为樟疫霉菌;紫色表示检测结果为阴性,待检微生物不是樟疫霉菌。

10.根据权利要求9所述的检测樟疫霉菌的方法,其特征在于:LAMP反应程序为:60℃~65℃,60~80min。

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