[发明专利]甲氧基去甲肾上腺素发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种甲氧基去甲肾上腺素发光免疫检测试剂盒，包括检测系统和样品前处理系统；其中检测系统包括直接或间接包被有抗甲氧基去甲肾上腺素抗体的固相载体，甲氧基去甲肾上腺素抗体溶液，亲和素连接示踪物溶液和校准品；样品前处理系统包括酸化液，酰化剂和碱性缓冲液。本发明克服了现有甲氧基去甲肾上腺素检测方法的缺点与不足，先对尿液或血浆中甲氧基去甲肾上腺素经过酸化、酰化前处理，采取一端为生物素的酰化剂酰化方案，使酰化后的甲氧基去甲肾上腺素被抗体识别并反应后，结合示踪标记物连接的亲和素的方法，准确地测定样本中的甲氧基去甲肾上腺素含量。制备的试剂盒灵敏度和精密度高，可实现检测的自动化，助力嗜铬细胞瘤的临床诊断。

技术领域

本发明涉及生物检测技术，尤其是涉及一种甲氧基去甲肾上腺素发光免疫检测试剂盒。

背景技术

甲氧基去甲肾上腺素（Normetanephrine，NMN）是去甲肾上腺素的代谢产物，它对于嗜铬细胞瘤的诊断、高血压病因研究及交感神经功能研究都是一种较有用的指标。NMN是一种单胺类神经递质，属于儿茶酚胺（CAs），是一种具有较强生理学活性的内源性物质，在大脑和神经信号传导中起着重要的作用。NMN是肾上腺素代谢的中间代谢产物，仅在肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤及副神经节瘤（PPGL）瘤体内代谢生成并且以高浓度水平持续存在，故是PPGL的特异性标记物。

在肾上腺肿瘤患者中，0. 5% ～1%是嗜铬细胞瘤的患者，嗜铬瘤细胞持续或间断地大量释放儿茶酚胺类物质，故临床主要有儿茶酚胺过高的症状，引起持续性或阵发性的高血压和多个器官的功能及代谢紊乱，患者可出现头疼、心悸、多汗三联征及高血压等症状，特别严重者可并发急性左心衰竭或脑血管意外。本病还可以发生低血压，甚至休克，或出现高血压和低血压相交替的表现。目前，检测血浆中的儿茶酚胺类是诊断嗜铬细胞瘤常规的实验室手段。临床上，较常进行的相关检查指标包括肾上腺素和去甲肾上腺素，以及甲氧基去甲肾上腺素和儿茶酚胺的代谢产物香草扁桃酸等。

目前甲氧基去甲肾上腺素的市场主流检测方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定，但HPLC耗时比较久、成本高且较难实现批量测定，而酶联免疫测定法缺乏准确性和再现性。

发明内容

本发明的目的在于利用发光法提供一种甲氧基去甲肾上腺素发光免疫检测试剂盒，对尿液中甲氧基去甲肾上腺素的含量进行检测，以期对嗜铬细胞瘤的及时诊断和治疗提供帮助。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的甲氧基去甲肾上腺素发光免疫检测试剂盒，包括检测系统和样品前处理系统；其中：

所述的检测系统包括直接或间接包被有抗甲氧基去甲肾上腺素抗体的固相载体，甲氧基去甲肾上腺素抗体溶液，亲和素连接示踪物溶液和校准品；

所述样品前处理系统包括酸化液，酰化剂和碱性缓冲液。

所述示踪物为金刚烷、吖啶酯、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、碱性磷酸酶（ALP）或辣根过氧化物酶（HRP）中的至少一种。

所述亲和素为重组或天然纯化的亲和素，其使用浓度为1/1000～1/20000，其缓冲液中包含1～50 g/L的BSA或其它蛋白如Casein，鱼明胶等。

所述甲氧基去甲肾上腺素抗体为单克隆或多克隆抗体，所述固相包被的载体材料为磁性微球或微孔板（包括透明或不透明微孔板）。

所述磁性微球的直径为0.1-8μm，表面连接有一种或多种活性功能基团，包括但不限于-COOH、-NH₂、-OH，具有在外加磁场作用下可迅速被磁化，在撤走磁场后剩磁为零的属性。

所述抗甲氧基去甲肾上腺素抗体可以通过直接或间接包被的方法包被于磁性微球上，也可以以抗体溶液的形式在反应中连接于磁性微球上。