[发明专利]一种产3-羟基丙酸的重组假单胞菌及其构建方法

权利要求书

1.一种产3-羟基丙酸的重组假单胞菌的构建方法，其特征在于，包括步骤：

S1：敲除脱氮假单胞菌基因组DNA中的fabF基因；

S2：将乙酰辅酶A羧化酶基因accABCD，丙二酰辅酶A还原酶基因mcrN、mcrC基因在fabF基因缺失的脱氮假单胞菌中过表达；

所述fabF基因如SEQ ID No.1所示；所述乙酰辅酶A羧化酶基因accABCD由accA基因、accB、accC和accD组成，所述accA基因如SEQ ID NO.4所示，所述accB基因如SEQ ID NO.5所示，所述accC基因如SEQ ID NO.6所示，所述accD基因如SEQ ID NO.7所示；所述假单胞菌是脱氮假单胞菌ATCC13867。

2.根据权利要求1所述的一种产3-羟基丙酸的重组假单胞菌的构建方法，其特征在于，所述丙二酰辅酶A还原酶基因mcrN、mcrC来源于嗜热光合绿丝菌。

3.根据权利要求1所述的一种产3-羟基丙酸的重组假单胞菌的构建方法，其特征在于，所述乙酰辅酶A基因accADBC来源于脱氮假单胞菌。

4.根据权利要求1所述的一种产3-羟基丙酸的重组假单胞菌的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中的过表达方法为下列方法之一：

方法一：将所述乙酰辅酶A羧化酶基因accABCD，所述丙二酰辅酶A还原酶基因mcrN、mcrC基因构建到原核表达载体上，然后导入所述fabF基因缺失的脱氮假单胞菌中，构建得到重组假单胞菌；

方法二：将所述乙酰辅酶A羧化酶基因accABCD，所述丙二酰辅酶A还原酶基因mcrN、mcrC基因整合到所述fabF基因缺失的脱氮假单胞菌基因组中，构建得到重组假单胞菌。

5.根据权利要求4所述的一种产3-羟基丙酸的重组假单胞菌的构建方法，其特征在于，所述方法一具体包括：将所述乙酰辅酶A羧化酶基因accABCD，所述丙二酰辅酶A还原酶基因mcrN、mcrC基因构建到大肠杆菌-假单胞菌穿梭质粒pUCPK上，得到的重组菌体pUCPK-AMnc，然后用pUCPK-AMnc转化假单胞菌，得到的重组菌ZAP_ΔfabF-AMnc。

6.由上述任一权利要求所述的一种产3-羟基丙酸的重组假单胞菌的构建方法所构建的基因工程假单胞菌菌株。

7.权利要求6所述的基因工程假单胞菌菌株在生产中的3-羟基丙酸应用。

8.根据权利7中所述的基因工程假单胞菌菌株在生产中的3-羟基丙酸应用，其特征在于，所述应用具体包括：以乙酸为原料进行好氧发酵，所用发酵培养基配方为：100mmol/LpH＝7.0的磷酸缓冲液、8g/L乙酸钠、0.25g/L硫酸镁、1g/L氯化铵、1g/L酵母膏；生物素2.2mg/L；摇床发酵条件为：以接种后OD600＝0.1的接种量将种子液接种到50mL发酵培养基中，发酵采用250mL三角瓶，控制温度37℃、250rpm，发酵时间47小时。