[发明专利]一种用于检测AML1-ETO融合基因的试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测AML1‑ETO融合基因的试剂盒，包括AML1‑ETO融合基因扩增检测试剂组，所述AML1‑ETO融合基因扩增检测试剂组包括用于扩增AML1‑ETO融合基因的引物对和检测探针。本发明的试剂盒设计了适用于基于微滴式数字PCR系统的引物和探针，以及相应的对照，使其能够用于基于微滴式数字PCR系统的检测系统。检测流程的自动化程度高，效果好，操作非常简便易上手，适宜临床应用及推广。

技术领域

本发明涉及AML1-ETO融合的检测领域，更特别地，涉及一种用于检测AML1-ETO融合基因的试剂盒。

背景技术

AML1-ETO融合基因是t(8；2l)(q22；q22)使21号染色体上的AML1基因与8号染色体上的ETO基因发生融合而形成的一种嵌合蛋白。其产物融合蛋白通过与CBFβ形成异二聚体而调节基因的表达，并与DNA结合而抑制转录，并且通过抑制CBF靶基因的表达导致髓系分化的阻滞。在急性髓系白血病(AML)特别是AML-M2型白血病的发生发展中起着非常重要的作用。据文献报导，M2b出现AML1-ETO融合基因阳性率占95％以上，AML其他各亚型亦可出现，但极为少数。

对AML1-ETO融合的检测有助于病情诊断、疗效评价、预后及对微小残留病变复发的监测。目前常用的实验室检测方法主要是荧光定量PCR检测。但现有商品化试剂盒的灵敏度基本都在1％以上，并且在检出限附近的检测灵敏度和稳定性均欠佳，因此无法满足对预后及微小残留病变复发的监测要求。另外，现在的荧光定量方法都是采用人工标准品进行相对定量，无法准确定量AML1-ETO的准确拷贝数，做到绝对定量，每次需要做标准曲线，操作难度也较大，重现性较差。

因此，需要一种能够满足临床上最新的诊疗需求，并且操作简便、结果准确、成本低廉和高通量的新型AML1-ETO融合基因检测试剂盒。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种用于检测AML1-ETO融合基因的试剂盒，包括AML1-ETO融合基因扩增检测试剂组，所述AML1-ETO融合基因扩增检测试剂组包括用于扩增AML1-ETO融合基因的引物对和检测探针。

在一个优选实施方案中，用于扩增AML1-ETO融合基因的引物对的序列如SEQ IDNO:1和2所示，检测AML1-ETO融合基因的探针的序列如SEQ ID NO:3所示。

在一个优选实施方案中，所述AML1-ETO融合基因扩增检测试剂组制成用于检测AML1-ETO融合基因的引物探针预混合液，所述AML1-ETO融合基因的引物探针预混合液中每条引物的浓度为500nM-1000nM，探针的浓度为200nM-400nM。

在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包括参考基因扩增检测试剂组，所述参考基因扩增检测试剂组包括用于扩增参考基因的引物对和检测探针。

在一个优选实施方案中，所述参考基因为ABL基因。

在一个优选实施方案中，用于扩增ABL基因的引物对的序列如SEQ ID NO:4和5所示，检测ABL基因的探针的序列如SEQ ID NO:6所示。

在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包括阳性对照和/或阴性对照，所述阳性对照为含有不低于500拷贝/μL的AML1-ETO融合基因的溶液，所述阳性对照为不含AML1-ETO融合基因或AML1-ETO融合基因低于0.1拷贝/μL的溶液。

在一个优选实施方案中，所述阳性对照和阴性对照中均含有不低于1000拷贝/μL的ABL基因。

在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包括反转录酶和DTT。

在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包括用于PCR反应的试剂。