[发明专利]一种用于四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针及其合成

权利要求书

1.一种四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针，其特征在于该探针的结构如下：

2.根据权利要求1所述的一种四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针的合成方法，其特征在于按照如下步骤进行：

(1)中间体的合成：

将4-溴-5-硝基-1,8-萘酐，4-氨基丁酸乙酯盐酸盐，三乙胺溶于乙醇中；将反应液加热至40-90℃，搅拌1-24h；将反应液冷却至室温后，减压除去溶剂后，硅胶柱分离，以体积比1:6-4的二氯甲烷和石油醚为洗脱剂，减压除去溶剂得米白色固体

(2)中间体的合成：

将溶于乙二醇甲醚中，并向其中依次加入环己二胺；将反应液缓慢升温至50-140℃，并在氮气保护下反应10-24h；减压除去溶剂，硅胶柱分离，以体积比400-50:1的二氯甲烷和甲醇为洗脱剂，除去溶剂，得棕黄色固体

(3)中间体的合成

取溶于甲醇中，并向反应液中滴加2M氢氧化钠溶液；室温下反应1-3h后，减压蒸馏除去甲醇，过滤并用水洗涤滤饼干燥后得

(4)中间体的合成

将二环己基碳二酰亚胺溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺后，室温搅拌10-40min；N-羟基琥珀酰亚胺溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺并加入反应液中；2-5h后减压除去溶剂，硅胶柱分离，以体积比20-4:1的二氯甲烷和乙酸乙酯为洗脱剂，除去溶剂后得

(5)荧光探针合成

将与4-(4-甲基-2,3,5,6-氮杂苯)基苄胺三氟乙酸盐置于史莱克瓶中，并用氮气置换2-5次；二异丙基乙基胺溶于干燥的二甲基亚砜中并加入反应瓶中；室温下搅拌3-10h后，水洗并用二氯甲烷萃取得有机相，硅胶柱分离得探针。

3.根据权利要求2所述的一种四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针的合成方法，其特征在于步骤(1)中，4-溴-5-硝基-1,8-萘酐、4-氨基丁酸乙酯盐酸盐、三乙胺的质量比为1:1-3:1-3；

4-溴-5-硝基-1,8-萘酐的质量与乙醇的体积比为1:20-80g/mL。

4.根据权利要求2所述的一种四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针的合成方法，其特征在于步骤(2)中，其中，与环己二胺的质量比为1:1-3；

的质量与乙二醇甲醚的体积比为50:1mg/mL。

5.根据权利要求2所述的一种四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针的合成方法，其特征在于步骤(3)中，的质量与甲醇的体积比为4:1mg/mL或者20:1mg/mL；

甲醇与2M氢氧化钠溶液、水的体积比为1:1:1。

6.根据权利要求2所述的一种四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针的合成方法，其特征在于步骤(4)中，二环己基碳二酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺质量比为1:1-5:1-10；

的质量与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为10:1mg/mL或25:1mg/mL。

7.根据权利要求2所述的一种四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针的合成方法，其特征在于步骤(5)中，与4-(4-甲基-2,3,5,6-氮杂苯)基苄胺三氟乙酸盐的质量比为1:1-5；

二异丙基乙基胺与二甲基亚砜的体积比为1:250-1000；

的质量与二甲基亚砜的体积比为5-60:1mg/mL。

8.一种如权利要求1所述的四嗪类生物正交标记的增强型荧光探针的应用，该探针能够与亲二烯发生高速率的生物正交反应用以标记生物分子。