[发明专利]一种耐高温纤维素酶制剂的制备方法

权利要求书

1.一种耐高温纤维素酶制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将梭热杆菌按照1%的接种量接种到种子培养基中，60℃活化培养，按照同样的方式活化2-3代，继续于种子培养基中培养，得到种子液；

2）将步骤1）得到的种子液按照2%的接种量接种到发酵培养基中，得到一级种子液，将一级种子液以2.5%的接种量接种到装有发酵培养基的发酵罐中，厌氧培养，罐温控制为40-60℃，调节pH为5.5-8，间歇式搅拌，在发酵开始后的16h-48h时间段内向发酵体系中缓慢添加纤维二糖溶液，流速为0.5-1.5mL/min，上述纤维二糖溶液浓度为150-250g/L，发酵培养48-96h，得到发酵液；

3）将步骤2）得到的发酵液进行固液分离，去除菌体，将滤液进行浓缩，浓缩至原体积的20%，再进行硫酸铵沉淀，得到纤维素酶粗品，然后进行凝胶层析纯化，干燥后得到耐高温的纤维素酶制剂；

上述种子培养基含有以下组分：纤维二糖5-15g/L，玉米浆5-17g/L，柠檬酸三钾盐0.5-5g/L，一水柠檬酸0.5-2g/L，硫酸钠0.5-1.5g/L，磷酸二氢钾0.5-1.5g/L，碳酸氢钠1-5g/L，氯化铵1-3g/L，尿素2-8g/L，酵母抽提物0.5-1.5g/L，六水氯化镁40-60g/L，四水氯化亚铁0.05-0.2g/L，二水氯化钙0.1-0.3g/L，一水半胱氨酸盐酸盐0.5-2g/L，二盐酸吡哆胺0.01-0.05g/L，对氨基苯甲酸0.002-0.006g/L，D-生物素0.001-0.003g/L，维生素B₁₂ 0.01-0.03g/L，维生素B_l 0.001-0.003g/L，pH值自然；

上述发酵培养基为在种子培养基的基础条件下添加5-15g/L的微晶纤维素。

2.如权利要求1所述的一种耐高温纤维素酶制剂的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中种子培养基含有以下组分：纤维二糖10g/L，玉米浆12g/L，柠檬酸三钾盐2g/L，一水柠檬酸1.25g/L，硫酸钠lg/L，磷酸二氢钾lg/L，碳酸氢钠2.5g/L，氯化铵1.5g/L，尿素5g/L，酵母抽提物lg/L，六水氯化镁50g/L，四水氯化亚铁0.1g/L，二水氯化钙0.2g/L，一水半胱氨酸盐酸盐lg/L，二盐酸吡哆胺0.02g/L，对氨基苯甲酸0.004g/L，D-生物素0.002g/L，维生素B₁₂0.02g/L，维生素B_l 0.002g/L，pH值自然。

3.如权利要求1所述的一种耐高温纤维素酶制剂的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中罐温控制为55℃，调节pH为7。

4.如权利要求1或2所述的一种耐高温纤维素酶制剂的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中发酵培养基为在种子培养基的基础条件下添加10g/L的微晶纤维素。

5.如权利要求1或2所述的一种耐高温纤维素酶制剂的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中发酵培养60h。

6.如权利要求1或2所述的一种耐高温纤维素酶制剂的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中纤维二糖溶液添加流速为1mL/min，纤维二糖溶液浓度为200g/L。