[发明专利]一种稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。以稳定同位素标记苯甲醛与对甲苯磺酰肼为原料，在溶剂存在作用下，得到稳定同位素标记苯甲醛与对甲苯磺酰肼缩合的中间体，在无机碱和催化剂作用下，与邻苯二甲酰亚胺反应，并最后经盖布瑞尔胺合成法一锅法得到稳定同位素标记的苄胺，然后与6‑氯嘌呤经亲核取代反应，纯化，得到稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤纯品。合成所需原料、中间体简单易得，目标产物稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤化学纯度可达98％以上，同位素丰度可达99％以上，能满足液相色谱串联质谱法所需内标试剂的技术要求。目前全球尚未发现有该结构稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤的制备文献，研制稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤对食品安全监管检测工作有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。

背景技术

6-苄基腺嘌呤(6-Benzyladenine，CAS No.：1214-39-7)，是第一个人工合成的细胞分裂素，主要用于促进细胞分裂、细胞增大、种子发芽和果实生长等，我国曾经允许在豆芽生产上的应用，俗称的“无根粉”其主要成分就是6-苄基腺嘌呤。6-苄基腺嘌呤作为植物生长调节剂，其安全性目前没有结论，并且缺乏食品添加剂工艺必要性，目前我国的标准GB2760已经禁止6-苄基腺嘌呤作为食品用加工助剂生产经营和使用。国家食品药品监督管理总局、农业部、国家卫生和计划生育委员会在2015年4月13日发布的《关于豆芽生产过程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的公告》(2015年第11号)中重申了“生产者不得在豆芽生产过程中使用6-苄基腺嘌呤，豆芽经营者不得经营含有6-苄基腺嘌呤的豆芽”。目前，相关的检测标准方法为高效液相色谱法《GB/T 23381-2009食品中6-苄基腺嘌呤的测定高效液相色谱法》和液相色谱串联质谱法《DB 33/T 625.3-2007(2016)无公害豆芽第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定》、《DB 64/T 1493-2017豆芽中赤霉素、6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、2，4-滴的测定液相色谱-串联质谱法》，因无相应的稳定同位素标记内标化合物，目前只能用外标法来进行检测。从理论上讲，内标法最好是使用该化合物对应的稳定同位素标记内标化合物。因此，本发明所涉及食品安全检测用稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤的研制，填补了此类检测领域的空白。目前全球尚未发现有该结构稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤的制备文献，研制稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤对我国相关的食品安全监管检测工作具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种适用于食品安全检测用6-苄基腺嘌呤的内标试剂-稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤的制备方法。该合成方法原料易得，产品收率高，并且同位素丰度不稀释，有效降低了产品成本。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种食品安全检测用稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤的制备方法，该稳定同位素标记的6-苄基腺嘌呤的化学结构如式(I)所示：

其中，(I)中R为H或D，*为¹²C或¹³C，其合成步骤总路线为：

其中，R为H或D，*为¹²C或¹³C

(1)在有机溶剂存在条件下，加入稳定同位素标记苯甲醛，然后加入对甲苯磺酰肼，在氮气保护下，在20℃～120℃条件下，反应0.5～6小时。TLC跟踪反应原料反应完全后，无需处理，直接进行下一步反应。