[发明专利]一种褐飞虱OBP蛋白编码基因OBP11及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种褐飞虱OBP蛋白编码基因OBP11及应用，所述的褐飞虱OBP蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。该OBP在褐飞虱生长发育过程中起着必不可少的作用，沉默该基因对褐飞虱有致死效果，且序列具有较强的靶标特异性对其它种类的昆虫及物种均无杀伤作用。因此本发明为褐飞虱的防治及抗性品种的培育提供新的方向和理论依据。

技术领域

本发明属于生物技术领域，主要涉及一种褐飞虱OBP蛋白编码基因OBP11及应用。

背景技术

褐飞虱是我国常见的重要的稻田害虫，广泛分布于亚洲地区的一种水稻及野生稻上的专食性害虫在我国南起海南，北至吉林，主要在长江流域、西南、华南等水稻种植区为害，由于其为刺吸式害虫，繁殖能力强，且主要分布在稻丛基部，导致防治较为困难。随着化肥农药的使用的加剧，褐飞虱抗药性的增强，导致褐飞虱的发生逐年增加，严重影响了我国水稻的产量。为探究新的抗虫的方法，增加粮食产量，开展研究褐飞虱的致死基因的功能和作用对新品种的培育及对褐飞虱的防控具有重要价值。。

气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)是存在于昆虫嗅觉感器淋巴液中的水溶性蛋白，其分子量较小，主要识别挥发性气味和性信息素，对于昆虫寻找寄主以及交配起到重要的作用。现阶段的也有研究表明，气味结合蛋白作为小分子的运载蛋白，在昆虫生长发育以及改变宿主免疫等方面起着重要的作用。昆虫缺失某种该蛋白时会严重影响昆虫的生长发育，使其发育变慢甚至死亡，能够减少其繁殖代数和存活率。

本申请利用二代测序技术(Solexa HiSeq2000)对褐飞虱唾液腺进行转录组测序及De novo拼接。分析找到褐飞虱中气味结合蛋白的候选基因并利用转基因技术在植物中表达双链RNA(dsRNA)，当褐飞虱取食时达到基因沉默效果，发现其可以降低褐飞虱的存活率。

本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中所提及的OBP基因。此编码基因在褐飞虱生长发育过程中有重要的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种褐飞虱气味结合蛋白编码基因OBP11，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。该OBP在褐飞虱生长发育过程中起着必不可少的作用，沉默该基因对褐飞虱有致死效果。

本发明另一个目的在于提供一种褐飞虱OBP编码基因OBP11在防治褐飞虱中的应用。

为达到以上目的，本发明采用以下技术措施：

一种褐飞虱气味结合蛋白的编码基因OBP11，通过下述方法得到：

以褐飞虱cDNA作为模板，设计引物O1：5'-ATGAAGTCGTTCATCGTTTG-3'；O2:-TCACGGCCGTCTCCTTCTTA-3'进行PCR扩增，PCR条件如下：

3min,95℃；30s 94℃；and 60s 57℃,1min 72℃35个循环；10min,72℃；1min,25℃。

最终获得了OBP11基因，其序列为SEQ ID NO.1所示，对应的氨基酸序列为SEQ IDNO.2所示，编码SEQ ID NO.2所示蛋白的多核苷酸也属于本发明的保护范围。

一种褐飞虱OBP基因OBP11在防治稻田褐飞虱中的应用，其应用过程如下：

将褐飞虱OBP11编码基因通过农杆菌介导遗传转化转入水稻原生质体中，让水稻表达双链RNA，然后按照常规方式进行水稻的栽培即可，可获得对褐飞虱具有抗性的转基因品系植株。