[发明专利]一种基于RPA检测番茄褪绿病毒的方法在审
| 申请号： | 201811552637.6 | 申请日： | 2018-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN109371173A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 宋建;金凤媚;薛俊 | 申请（专利权）人： | 天津市农业生物技术研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 朱红星 |
| 地址： | 300089 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 番茄 检测 病毒 总RNA提取 检测引物 植株 病害 合成 感染 防治 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于检测番茄褪绿病毒的特异性引物，其特征在于所述的引物序列为
F4: 5’-GATTTGATAAATGAGGTTAGACCCAAAATG-3’，
R5:5’-CGTTTCTTTTCATAAGTAGGTTCGAGATAA-3’。
2.一种采用权利要求1所述的特异性引物进行番茄褪绿病毒的检测方法，其特征在于按如下的步骤进行：
（1）总RNA 提取及cDNA 的合成：
将提取的RNA制备成cDNA，-20℃保存备用；
（2）引物设计：设计检测番茄褪绿病毒的RPA检测引物；
（3）检测：
以制备的cDNA为模板，利用设计的引物进行RPA扩增，同时设置阴性对照，RPA扩增体系的配制方法如下: 向含有冻干酶粉的0.2mL TwistAmp反应管中加入再水化缓冲液29.5μL，去离子水10μL，上、下游引物各2.5μL(终浓度为0.4μmol/L)，模板cDNA3μL，最后再加入醋酸镁溶液2.5μL，280 mmol /L；将RPA扩增体系充分混匀，置于39℃的金属浴上反应40 min，RPA反应结束后，利用纯化试剂盒对RPA扩增产物进行回收纯化，取产物5μL于1.5 %琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统上观察结果。
3.采用权利要求2所述的方法在用于快速有效的鉴定出感染番茄褪绿病毒的植株方面的应用。
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