[发明专利]一株富硒短小芽孢杆菌菌株D1-019及其分离筛选方法和应用

说明书

一株富硒短小芽孢杆菌菌株D1‑019及其分离筛选方法和应用，该菌株于2018年07月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏序号为：CCTCC M No:2018459。所述富硒短小芽孢杆菌菌株Bacillus pumilus D1‑019采用光密度法和红硒法进行筛选，对种鸭饲料来源益生菌进行逐级耐无机硒筛选，筛选出耐硒能力强的菌株，通过形态观察和16S rDNA分子生物学鉴定方法，鉴定出D1‑019菌为短小芽孢杆菌。所述菌株有机硒转化率达100％，并在一定时间内增加饲料与食品中的有机硒含量。作为一种新型有机硒源，能够应用于饲料、饲料发酵剂、食品和保健品领域。

技术领域

本发明涉及食品生物技术领域，具体是一株富硒短小芽孢杆菌菌株Bacilluspumilus D1-019及其分离筛选方法和应用。

背景技术

硒是生物体必需的一种重要微量元素，与机体正常生理功能的维持以及多种疾病的发生发展密切相关。一旦缺硒，就会引发许多症状，同时会影响基因的表达和正常生理代谢的紊乱；缺硒会使幼畜出现白肌病。归纳起来，硒的生物学功能有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、保肝解毒、提高机体免疫力、调节机体代谢、影响繁殖功能等。现如今，部分地区的补硒主要手段仍是利用无机硒化合物制成补充剂，但是其毒副作用和利用率的弊端越来越被放大，需要改变补硒方式。有机硒补硒被认为是最安全也是最有效的手段。自上世纪八九十年代起，国内外对生物补硒的关注和研究持续至今，对硒的转化机理的了解越来越深入。

益生菌作为一种无毒、无抗药性、无副作用、无残留且无污染的饲料添加剂而受人们重视。目前，《饲料添加剂品种目录》2013版中允许添加的微生物菌种共35种。其中，芽孢杆菌是最理想的微生物添加剂之一，它具有较高的蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶活性，对植物性碳水化合物有较强的降解能力，且物理性质十分稳定，因而在饲料中的应用研究也非常多。大量研究表明，在日粮中添加适量的富硒益生菌可以提高幼畜的生产性能，显著提高免疫功能、抗氧化水平和基因表达水平。富硒益生菌也可以拮抗致病菌在动物肠道定植；可以抗诱变及抗癌；调节肠道菌群。

富硒微生物中，研究最为成熟的是富硒酵母和富硒乳酸菌，现已进入工业化生产阶段，但是对芽孢杆菌的富硒条件研究极少。目前，饲用富硒益生菌的研究呈现出以下问题：高富硒转化率的益生菌种类开发少；富硒益生菌菌株在饲料中的活力和适应性需经过研究和安全性评价才可添加进入饲料等。因此，有必要开发新型高效合成有机硒的益生菌，特别是适用于生物饲料领域的富硒芽孢杆菌。

发明内容

本发明的目的是提供一株富硒短小芽孢杆菌菌株Bacillus pumilus D1-019及其分离筛选方法和应用。

本发明的技术方案是：一种富硒短小芽孢杆菌菌株Bacillus pumilus D1-019，该菌株于2018年07月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏序号为：CCTCC M No:2018459。

所述富硒短小芽孢杆菌菌株Bacillus pumilus D1-019的16s rDNA序列如序列表SEQ ID No.1所示。

所述富硒短小芽孢杆菌菌株Bacillus pumilus D1-019的富硒培养方法，培养基中亚硒酸钠浓度为0-1730μg/mL、5-500μg/mL、5-20μg/mL、20μg/mL或为15μg/mL。

所述富硒短小芽孢杆菌菌株Bacillus pumilus D1-019的分离和筛选方法，根据菌体颜色和红硒现象，对种鸭饲料来源菌株的耐硒能力进行初筛、复筛、鉴定，分离出高有机硒转化率的菌株，具体步骤为：