[发明专利]一种脂肪组织保存液及其应用

说明书

本发明涉及组织培养技术领域，公开了一种脂肪组织保存液及其应用。本发明所述脂肪组织保存液包括非必需氨基酸和枸橼酸钠的磷酸缓冲液。本发明采用非必需氨基酸和枸橼酸钠的磷酸缓冲液配制脂肪组织保存液，保持了脂肪组织的活性，提高分离的SVF的细胞数量和细胞活率，同时也可防止脂肪组织中多余的血液成分凝集，防止脂肪颗粒结团，达到高效分离SVF的目的，可应用到分离SVF中。

技术领域

本发明涉及组织培养技术领域，具体涉及一种脂肪组织保存液及其应用。

背景技术

脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成，是体内最大的“能源库”，具有贮存脂肪、保持体温和参与脂肪代谢的功能，同时脂肪还参与能量代谢，并具有产生热量、维持体温、缓冲保护和支持填充等作用。此外，它还是具有多向分化潜能的多功能细胞的来源之一，而这种多功能细胞就存在于脂肪组织的血管基质部分中。

脂肪组织中的血管基质部分(SVF)是一个脂肪来源干细胞与血管内皮细胞、外周血细胞、T细胞及其他炎症细胞相混杂的群体，在体内环境下能够分化为成熟脂肪细胞，促进宿主干细胞向受区的定向迁移，部分参与了构成新生血管内皮细胞，有助于移植脂肪组织早期血供的建立。

SVF是脂肪组织经酶消化、过滤、离心除去脂肪组织细胞后得到的，SVF 的细胞活力和细胞数量直接影响自体脂肪组织移植成功率和效率。而SVF的细胞活力和细胞数量又和脂肪组织的质量有着直接的关系，因此脂肪组织的保存显得尤为重要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种脂肪组织保存液，使得经所述保存液保存过的脂肪组织，在分离SVF时SVF细胞数量和细胞活率较高；

本发明的另外一个目的在于提供上述保存液在分离SVF中的应用或在制备分离SVF的试剂中的应用。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种脂肪组织保存液，包括非必需 氨基酸和枸橼酸钠的磷酸缓冲液。

其中，所述非必需氨基酸为L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬酸、L-甘氨酸、L-丝氨酸、L-脯氨酸和L-谷氨酸，可采用商品化产品MEM NEAA(原液 100X，即10mM，购自于Sigma公司，#M7145)，本发明实际使用时需稀释至1X，即0.1mM。

作为优选，所述枸橼酸钠的磷酸缓冲液为30-50μg/ml枸橼酸钠的1X PBS 磷酸缓冲液，在具体应用时枸橼酸钠的浓度可选择为30、35、40、45或50μg/ml。作为优选，每升所述1X PBS磷酸缓冲液配制方法如下：

分别称取氯化钠8g，氯化钾0.2g，十二水磷酸氢二钠3.63g，磷酸二氢钾 0.24g，溶于900ml超纯水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，高温高压灭菌。

以不加任何保存液的脂肪组织、经过DMEM培养基保存24h的脂肪组织以及经过本发明保存液保存24h的脂肪组织进行对比试验，统计各组SVF细胞数量和细胞活率，结果显示本发明实验组的细胞数量在4.0*10⁶左右，存活率在98％左右，与新鲜采集的脂肪组织(0h)分离的SVF无显著差异；而另外两个对比组SVF状态明显出现下降；

同时，细胞形态结果显示，和对比组相比，本发明实验组细胞贴壁率较高，细胞形态呈长梭形，比较透亮。

基于此优异的技术效果，本发明提出了所述保存液在分离SVF中的应用或在制备分离SVF的试剂中的应用。

由以上技术方案可知，本发明采用非必需 氨基酸和枸橼酸钠的磷酸缓冲液配制脂肪组织保存液，保持了脂肪组织的活性，提高分离的SVF的细胞数量和细胞活率，同时也可防止脂肪组织中多余的血液成分凝集，防止脂肪颗粒结团，达到高效分离SVF的目的。

附图说明