[发明专利]毛形线虫属物种的抗原检测

说明书

本发明旨在用于检测组织提取物样品中的毛形线虫属(Trichinella)物种的方法，根据本发明的检测系统用于检测毛形线虫属物种的用途，以及试剂盒，所述试剂盒包含：(a)检测载体，其包含针对毛形线虫属物种的一种或多种抗原的一抗，和(b)(i)针对毛形线虫属物种的一种或多种抗原的二抗，其中所述二抗与信号分子相连接，或(b)(ii)与信号分子相连接的毛形线虫属物种的一种或多种抗原，其中来自(b)(ii)的抗原如此来设置，从而使得它们通过竞争性排挤来解除来自(a)的抗原与一抗的结合。

本发明旨在用于检测组织提取物样品中的毛形线虫属(Trichinella)物种的方法，根据本发明的检测系统用于检测毛形线虫属物种的用途，以及试剂盒，所述试剂盒包含：(a)检测载体，其包含针对毛形线虫属物种的一种或多种抗原的一抗，和(b)(i)针对毛形线虫属物种的一种或多种抗原的二抗，其中所述二抗与信号分子相连接，或(b)(ii)与信号分子相连接的毛形线虫属物种的一种或多种抗原，其中来自(b)(ii)的抗原如此来设置，从而使得它们通过竞争性排挤来解除来自(a)的抗原与一抗的结合。

旋毛形线虫(Trichinella spiralis)是毛形线虫属的线虫，并且可以在人中引起严重的疾病。所谓的毛形线虫病通过食用了被毛形线虫感染的生的或未充分加热的肉类而发生。该疾病的症状最初是恶心、腹泻和肌肉疼痛。随着疾病进展，尤其出现麻痹现象、面部肿胀(特别是眼眶周围)、结膜炎、头痛、皮疹和心肌炎[1]。通常，该寄生虫通过各种不同的哺乳动物例如家猪、马、熊、野猪或啮齿动物的肉来进行传播。已经知道毛形线虫属的11种不同物种，其被划分为两个群组：在宿主生物的肌细胞中形成它们被其持久地包围的胶原包囊的物种，例如旋毛形线虫；和不形成包囊的物种，例如假旋毛形线虫(T.pseudospiralis)[2]。

除了很少的例外，旋毛形线虫不依赖于气候地在世界范围内存在。在欧盟(EU)，在来源于商业育种场和育肥场的家猪中罕见有毛形线虫病的病例，但是在野生动物例如野猪、狐狸和貉或者私人饲养的猪中患病率明显较高。在中国，猪中的患病率通常为直至4％。在那里在1964年和2002年之间发生了超过500起爆发，总共超过25,000人患病[3]。

旋毛形线虫的生活史是广泛已知的。在经口摄入被旋毛形线虫感染的食物后，通过胶原包囊被消化液瓦解，幼虫在大约24小时后被释放到小肠中。经过四次蜕皮，幼虫发育为成虫形态并且与雌虫发生交配。在5-10天后，新的幼虫出生(NBL–新生幼虫)，其通过血液和淋巴管系统进行散布。6-12天后，幼虫侵入横纹肌肉系统中(ML–肌幼虫)，和在4-6周后，包囊形成开始，其中所述包囊随着时间而逐渐钙化。经过数年至数十年，发生与组织的代谢交换[4]。

为了在宿主的肌肉系统中存活多年，旋毛形线虫借助于分泌到周围组织中的众多蛋白质来操纵宿主免疫系统。所谓的排泄型和分泌型蛋白(E/S蛋白质)主要由杆状体(stichosome)分泌，所述杆状体由大约50个大的腺细胞即杆细胞(stichocyte)组成并且位于食管壁中。

毛形线虫检查(以前称为毛形线虫监察)是在屠宰后就旋毛形线虫对提供食物的动物的肉进行的检查。它是在必须进行检查的肉畜的情况下官方的肉畜和肉类检查的一部分，并且由于19世纪中叶发生了数次流行病而被引入。因此，1866年在普鲁士王国中已经引入了强制性的毛形线虫监察。如果肉类将会交付用于人类食用，那么在EU内的所有可能是旋毛形线虫的携带者的动物(例如家猪、马、熊或野猪)都必须进行检查(EC No.2015/1375)。

毛形线虫检查的花费为每只猪合计0.12€至3.70€，取决于屠宰场的大小和与此相关的肉畜数量[5]。

血清学在毛形线虫检查中并不适用，这是因为血清转变在20,000条幼虫的感染剂量的情况下在3-4周后发生和在100条幼虫的感染剂量的情况下在5-7周后发生[6]。