[发明专利]一种针对EGFR+肿瘤的融合蛋白及其应用

权利要求书

1.一种针对肿瘤抗原和免疫检查点的多功能融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括识别肿瘤抗原的抗体功能区、屏蔽肿瘤表面免疫抑制蛋白的功能区、结合免疫细胞的功能区以及用于连接各功能区的氨基酸片段。

2.根据权利要求1所述的多功能融合蛋白，其特征在于，所述识别肿瘤抗原的抗体为针对EGFR的单链抗体可变区；所述屏蔽CD47的融合蛋白功能区为SIRPα；所述与免疫细胞的结合区为融合蛋白的IgG1Fc片段。

3.根据权利要求2所述的多功能融合蛋白，其特征在于，所述SIRPα的氨基酸序列为SEQID NO：1所示序列；所述EGFR抗体的重链Fab氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示序列；所述EGFR抗体的轻链Fab氨基酸序列为SEQ ID NO：3所示序列；所述IgG1Fc的氨基酸序列为SEQ IDNO：4所示序列。

4.根据权利要求3所述的多功能融合蛋白，其特征在于，所述SIRPα的氨基酸序列为SEQID NO：1所示序列中的31-150位点或多个序列重复或含有类似功能突变体；所述EGFR抗体scFv的重链氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示序列中的1-118位点或类似功能的突变体；所述EGFR抗体scFv的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO：3所示序列中的1-107类似功能的突变体；所述IgG1Fc的氨基酸序列为SEQ ID NO：4所示序列中的3-219位点或具有类似功能的突变体；所述用于连接功能区的氨基酸序列为SEQ ID NO：5所示序列或多个重复序列。

5.根据权利要求2所述的的多功能融合蛋白，其特征在于，所述多功能融合蛋白为SEQID NO：6所示氨基酸序列或基于本发明原理而产生的类似功能结构。

6.根据权利要求5所述的多功能融合蛋白，其特征在于，制备所述融合蛋白的步骤包括：

步骤1)通过人工合成的方式合成SEQ ID NO：6所示氨基酸序列相对应碱基，组成融合蛋白构造基因；

步骤2)将步骤1)所述的融合蛋白构造基因转入哺乳动物表达载体，并转染至仓鼠卵巢细胞进行蛋白表达；

步骤3)将步骤2)所述的仓鼠卵巢细胞放置在孵箱中培养一段时间，取上清液，通过亲和层析纯化后制得重组融合蛋白。

7.根据权利要求6所述的的多功能融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白构造基因的构建步骤包括：根据SIRPα、抗EGFR抗体Fab和IgG1Fc的功能区氨基酸相对应的碱基，通过基因合成的方式与非功能氨基酸片段碱基连接成多功能融合蛋白构造基因。

8.一种如权利要求1～7中任一项所述的多功能融合蛋白在制备治疗表达CD47和EGFR肿瘤而引起的疾病的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用为多功能融合蛋白的单独应用或与化疗、靶向药物、抗体药物、细胞治疗组成的联合应用。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述疾病包括任何具有EGFR和CD47高表达的实体瘤。