[发明专利]一种哺乳动物胚胎性别鉴定方法有效
| 申请号： | 201811562124.3 | 申请日： | 2018-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN109402244B | 公开（公告）日： | 2022-05-03 |
| 发明（设计）人： | 张明;赵秀玲;左二伟;陆阳清;魏巍 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6879 | 分类号： | C12Q1/6879;C12N15/85;C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 苏雪雪 |
| 地址： | 530004 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 哺乳动物 胚胎 性别 鉴定 方法 | ||
1.一种哺乳动物胚胎性别鉴定方法，其特征在于，所述方法为：构建Y染色体含荧光报道基因的雄性哺乳动物模型；雄性哺乳动物与雌性哺乳动物进行交配后，通过观察荧光基因在胚胎中的表达鉴定动物胚胎性别为雄性或雌性；
所述雄性哺乳动物模型的构建方法为：在Y染色体两相邻的基因间选择打靶区，并确定打靶序列，根据打靶序列构建含荧光报道基因的donor载体；然后在sgRNA和Cas9 mRNA的共同作用下，Y染色体基因组被剪切，然后通过DNA存在修复模板的情况下通过同源重组进行修复的功能，将荧光报道基因定点插入Y染色体中；
所述打靶区位于Ddx3y基因和Uty基因之间；
所述打靶序列为5’-AGACTAGAGAGGCTCAATTCTGG-3’；
所述含荧光报道基因的donor载体的序列为SEQ ID NO:2;
所述sgRNA的体外转录模板扩增方式为：以质粒px330为模板，合成引物序列，在引物序列上添加T7启动子序列通过PCR扩增双链DNA，为体外转录sgRNA提供模板，所述引物序列的上游引物序列为：sgRNA-IVT-F：
5’-TAATACGACTCACTATAGGGAGACTAGAGAGGCTCAATTCGTTTTAGAGCTAGAAATAG-3’；
下游引物序列为：sgRNA-IVT-R：5’-AAAAGCACCGACTCGGTGCC-3’；
所述Cas9 mRNA的体外转录模板扩增方式为：以质粒px260为模板，合成引物序列，在引物序列上添加T7启动子序列通过PCR扩增双链DNA，为体外转录Cas9提供模板，所述引物序列的上游引物序列为：
CAS9 IVT F：5’-TAATACGACTCACTATAGGGAGATTTCAGGTTGGACCGGTG-3’；
下游引物序列为：CAS9 IVT R：5’-GACGTCAGCGTTCGAATTGC-3’。
2.根据权利要求1所述的一种哺乳动物胚胎性别鉴定方法，其特征在于，所述PCR反应体系为：
补水至总体积50μL。
3.根据权利要求1所述的一种哺乳动物胚胎性别鉴定方法，其特征在于，所述哺乳动物为小鼠。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广西大学，未经广西大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811562124.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
