[发明专利]一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置及检测方法

说明书

本发明公开了一种基于磁性氧化铁纳米粒子信号放大检测天蚕素B装置及方法，包括以下步骤：1）将上玻片及下玻片浸泡，然后冲洗后吹干；2）将上玻片浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片浸泡，然后冲洗后吹干；3）将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并温育，再冲洗后吹干；4）将待检测的磁性氧化铁复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再温育，然后冲洗后吹干；5）将上玻片放置于下玻片上，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后观察液晶池光学信号的颜色及亮度。该方法能够实现天蚕素B的检测，且检测成本低，检测灵敏度高，受客观环境影响较小，且检测速度快。

技术领域

本发明属于抗菌肽检测技术领域，涉及一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置及检测方法。

背景技术

Fe₃O₄纳米微粒是一种具有磁性的特殊纳米材料，具有良好的生物相容性、超顺磁性、低毒性等优点，现已被应用于药物载体、磁共振成像、生物分离等领域。王金玉等以磁性氧化铁为载体成功构建MDR1反义探针；鲍洁等利用靶向表皮生长因子受体的抗体与磁性氧化铁纳米颗粒结合，制备的表皮生长因子受体抗体-磁性氧化铁纳米颗粒造影剂可用于对肝癌细胞进行显像。刘益宏利用共沉淀法制备的磁性氧化铁成功用于搭载阿霉素，可用于对肿瘤的治疗。

天蚕素是最早被发现和研究的一种阳离子抗菌肽。天蚕素B对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌均具有很强的杀伤力，而对真菌和真核细胞没有毒，而在动植物抗病基因工程、植物育种、生物饲料添加剂等领域有着巨大的潜在应用价值。

然而，现有的检测手段，现有多肽检测方法有电位滴定法、高效液相色谱法等，电位滴定法滴定终点难以判定，且受客观环境影响大；高效液相色谱法的分析成本高，耗时长。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供了一种以磁性氧化铁为信号放大器检测天蚕素B的方法，该方法能够实现天蚕素B的检测，且检测成本低，检测灵敏度高，受客观环境影响较小，且检测速度快。

为达到上述目的，本发明所述的以磁性氧化铁为信号放大器检测天蚕素B的方法包括以下步骤：

1）将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，然后冲洗后吹干；

2）将上玻片浸入DMOAP水溶液中进行浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于60℃-80℃的乙醇溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，乙醇溶液中APTES与DMOAP体积比为3:1；

3）将经过步骤2）处理的下玻片浸泡在含有GA的水溶液中30-50min再冲洗后吹干；

4）将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并放置在37℃-50℃的温度下温育2.5-4h，再冲洗后吹干；

5）将待检测的磁性氧化铁复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再放置于28℃-40℃的温度下温育1.5-3h，然后冲洗后吹干；

6）将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。

步骤1）中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N₂吹干；

步骤2）中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N₂吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N₂吹干；

步骤3）中用超纯水进行冲洗，然后用N₂吹干；