[发明专利]一种利用热解糖高温厌氧菌和产琥珀酸放线杆菌混菌发酵生产丁二酸的方法

权利要求书

1.一种利用热解糖高温厌氧菌和产琥珀酸放线杆菌混菌发酵生产丁二酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将活化的热解糖高温厌氧菌接种到含有木聚糖的发酵培养基中进行发酵，发酵24~120小时；

（2）将活化的产琥珀酸放线杆菌接种到步骤（1）的发酵液中，发酵生产丁二酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述热解糖高温厌氧菌分类命名为热解糖高温厌氧菌（Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum），菌株号为M5，步骤（2）所述产琥珀酸放线杆菌分类命名为产琥珀酸放线杆菌（Actinobacillus succinogenes），菌株号为130Z。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述热解糖高温厌氧菌发酵48小时，将步骤（2）活化的产琥珀酸放线杆菌接种到步骤（1）得到的发酵液中，发酵生产丁二酸。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述活化的热解糖高温厌氧菌的接种量为发酵培养基体积的1-10%。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述发酵条件为：发酵温度50-65℃，发酵pH为5.5-8.5，转速0-120rpm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述含有木聚糖的发酵培养基配方为：0.5-2.0 g/L NaCl， 0.5-2.0 g/L K₂HPO₄，0.5-2.0 g/L KH₂PO₄，1.0-5.0 g/L 酵母粉，1.0-3.0 g/L 玉米浆干粉，0.2-1.0 g/L MgCl₂·6H₂O，0.1-0.6 g/L NH₄Cl，0.01-0.05g/L CaCl₂·2H₂O，0.5-2.0 g/L FeCl₂·4H₂O，0.1-0.5 g/L KCl，木聚糖30-90 g/L，溶剂为水，调节pH至5.5-8.5。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）热解糖高温厌氧菌活化条件为：将热解糖高温厌氧菌以接种量5 % v/v接种到活化培养基中，50-65 ℃、0-120 rpm活化48-96h，每隔12 h调节pH至5.5-8.5；活化培养基配方为0.5-2.0 g/L NaCl，0.5-2.0 g/L K₂HPO₄，0.5-2.0 g/L KH₂PO₄，1.0-5.0 g/L 酵母粉，1.0-3.0 g/L 玉米浆干粉，0.2-1.0 g/LMgCl₂·6H₂O，0.1-0.6 g/L NH₄Cl，0.01-0.05 g/L CaCl₂·2H₂O，0.5-2.0 g/L FeCl₂·4H₂O，0.1-0.5 g/L KCl，木聚糖30-90 g/L，溶剂为水，调节pH至5.5-8.5。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述活化的产琥珀酸放线杆菌的接种方式如下：将活化的产琥珀酸放线杆菌培养液离心，将离心得到的沉淀接种到步骤（1）得到的发酵液中，其中活化的产琥珀酸放线杆菌培养液与步骤（1）得到的发酵液体积相同。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述发酵条件为：发酵温度35-39℃，发酵时间为48 h，发酵pH为6.0-7.5，转速为100-200 rpm。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述产琥珀酸放线杆菌的活化条件如下：将产琥珀酸放线杆菌以接种量5 % v/v接种到活化培养基中，37℃、150 rpm活化12-24 h得到活化的产琥珀酸放线杆菌培养液；活化培养基配方为0.5-2.0 g/L NaCl，10-20 g/L K₂HPO₄，5-15 g/L NaH₂PO₄，5-15 g/L NaHCO₃，1.0-5.0 g/L 酵母粉，1.0-5.0 g/L玉米浆干粉，木糖30-90 g/L，加入40-70 g/L碱式碳酸镁，溶剂为水。