[发明专利]人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体及应用

说明书

本发明提供了人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体及人卡他莫拉菌免疫层析检测试纸条。用重组的卡他莫拉菌UspA1蛋白免疫Balb/c小鼠，得到一株分泌人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株Mc‑3#，保藏编号CCTCC NO：C2017212；利用该细胞株分泌的单抗制备胶体金免疫层析试纸条，以杂交瘤细胞株Mc‑3#分泌的单克隆抗体作为标记单抗，以抗UspA1蛋白多克隆抗体作为包被抗体，获得的试纸条具有检测速度快，特异性高，灵敏度高，稳定性强，制作简便等特点。结果清晰易于判断，能高效辅助卡他莫拉菌感染的临床诊断。

技术领域

本发明属于免疫学领域，涉及一种人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用。

背景技术

卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis，简称MC)首次发现于1896年，当时称之为卡他微球菌(Micrococcus catarrhalis)，尔后又称为卡他奈瑟菌(Neisseria catarrhalis)和卡他布兰汉菌(Branhamella catarhalis)。过去一直认为卡他莫拉菌是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌。但是，近20多年的研究发现，该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染，而且还是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌，是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常见致病菌，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌，而且其发病率逐年增加，尤其多见于慢性阻塞性肺病患者。卡他莫拉菌院内感染可通过呼吸道传播，有证据表明卡他莫拉菌在痰液中可生存3星期以上，所以呼吸病房尤易造成人与人间的传播。

目前检测呼吸道中致病微生物的方法主要以传统方法为主，即分离鉴定法，该方法所需时间长，一般要2-3天，很难满足快速鉴定的需要；近几年发展起来的PCR技术，是一种快速、灵敏、特异性好的技术，但是目前该技术还是依赖于传统方法的前增菌步骤，而增菌液中往往还有PCR抑制剂，从而影响扩增的效果。同时，该技术还需要专业的检测设备，不适合进行床旁检测。以抗体为基础的免疫学检测已成为人体病原微生物检测不可或缺的重要技术手段。目前已发展了多种特异性免疫检测技术，如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、荧光免疫分析(FIA)、化学发光免疫分析(CIA)、免疫沉淀反应、免疫凝集反应、ELISA检测试剂盒、免疫胶体金试纸条、免疫乳胶检测试剂等。其中ELISA检测试剂盒、免疫胶体金试纸条等多种以抗体为基础的免疫学检测技术，以其简便、快速、灵敏、准确、实用的特点已成为病原微生物检测不可或缺的重要手段。因而，研究开发具有自主知识产权的病原微生物的抗体，是开发拥有自主知识产权的ELISA检测方法、胶体金检测方法等的基础。

抗原成分的选择是检测特异性的关键。几乎所有致病性卡他莫拉菌表面均存在表面蛋白A(Ubiquitous surface protein A，UspA)。UspA主要包括两种蛋白分子，分别为相对分子质量约88000的UspA1和60000的UspA2。UspA1和UspA2是MC近年来研究最多的外膜蛋白，是不同临床分离菌几乎均可得到的高度保守的蛋白，其在MC表面形成一个较模糊的包裹层。UspAl/A2一般具有3个明显的结构，分别为头部(N末端)、颈部及跨膜(C一末端)结构域，其跨膜结构域的序列高度保守。UspAs是一类自主转运蛋白，作为一种配体，可与宿主细胞和组织表面的受体发生特异性的受体-配体相互作用。UspAs也是多功能的外膜蛋白，能够结合细胞外基质蛋白，如上皮细胞的纤连蛋白和细胞薄膜上的层黏连蛋白，在MC黏附到宿主上皮细胞方面起重要作用。UspAs还可通过结合补体蛋白c3来阻碍固有免疫系统中补体系统的调理杀菌作用，同时在患有慢性阻塞性肺部疾病的成人中，它们可激活患者的黏膜免疫系统，产生黏膜抗体IgA。UspA1蛋白序列中一个区域可与宿主肠结膜上皮细胞、黏连蛋白以及层黏连蛋白结合而起到黏附作用，其还参与病原菌生物膜的形成。另外，UspA1蛋白还可通过结合到一种广泛存在于宿主上皮细胞的癌胚抗原相关细胞黏附分子的糖蛋白上而被调节，从而增强其黏附作用。综上，UspA以其良好的保守性与表面可及性使其成为抗原检测的良好标的物。