[发明专利]基于卡他莫拉菌表面蛋白的乳胶微球免疫层析试纸的制备方法

说明书

本发明涉及一种快速检测卡他莫拉菌的乳胶免疫层析试纸条的制备方法，该试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、PVC板组成，结合垫上喷涂有彩色乳胶微球偶联的抗卡他莫拉菌表面蛋白多克隆抗体，硝酸纤维素膜上包被有抗卡他莫拉菌表面蛋白多克隆抗体的检测线和羊抗兔IgG抗体的质控线。当加入的样品中含有卡他莫拉菌时，卡他莫拉菌首先与乳胶‑兔抗卡他莫拉菌表面蛋白多克隆抗体形成复合物，在毛细作用下迁移至包被有卡他莫拉菌表面蛋白多克隆抗体的检测线时被捕捉，检测线呈相应的彩色，因而可检测样品中是否含有卡他莫拉菌。该试纸条具有快速、简捷、灵敏度高，特异性好的优点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种基于卡他莫拉菌表面蛋白的乳胶微球免疫层析试纸的制备方法。

背景技术

卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis，简称MC)首次发现于1896年，当时称之为卡他微球菌(Micrococcus catarrhalis)，尔后又称为卡他奈瑟菌(Neisseria catarrhalis)和卡他布兰汉菌(Branhamella catarhalis)。过去一直认为卡他莫拉菌是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌。但是，近20多年的研究发现，该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染，而且还是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌，是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常见致病菌，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌，而且其发病率逐年增加，尤其多见于慢性阻塞性肺病患者。随着抗生素、激素及免疫抑制剂的广泛应用，使人体寄生菌与宿主之间的关系发生了变化，院内感染率明显增加。由于肺部感染的致病菌与患者口咽部寄居的菌群密切相关，所以卡他莫拉菌可在条件适宜时致病。慢性阻塞性肺病患者久病体弱，长期应用广谱抗生素和激素，呼吸道防御功能及机体免疫力降低，使细菌进入下呼吸道而引起感染。

目前检测呼吸道中该病原体的方法主要以传统方法为主，即分离鉴定法，该方法所需时间长，一般要2-3天，很难满足快速鉴定的需要；近几年发展起来的PCR技术，是一种快速、灵敏、特异性好的技术，但是目前该技术还是依赖于传统方法的前增菌步骤，而增菌液中往往还有PCR抑制剂，从而影响扩增的效果。同时，该技术还需要专业的检测设备，不适合进行床旁检测。以抗体为基础的免疫学检测已成为人体病原微生物检测不可或缺的重要技术手段。目前已发展了多种特异性免疫检测技术，如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、荧光免疫分析(FIA)、化学发光免疫分析(CIA)、免疫沉淀反应、免疫凝集反应、ELISA检测试剂盒、免疫胶体金试纸条、免疫乳胶检测试剂等。其中免疫乳胶试纸条等多种以抗体为基础的免疫学检测技术，以其简便、快速、灵敏、准确、实用的特点已成为病原微生物检测不可或缺的重要手段。因而，研究开发具有自主知识产权的病原微生物的抗体，是开发拥有自主知识产权的ELISA检测方法、乳胶微球标记检测法等的基础。

抗原成分的选择是制备高特异性抗体的关键。卡他莫拉菌M35、McaP、OlpA及OmpCD蛋白均是位于细胞表面的重要分子，其保守性高，特异性强，抗原性强，表面暴露性高，是较为理想的检测标的物。本研究选用具有种间特异性的表面蛋白M35、McaP、OlpA及OmpCD等作为抗原，制备特异性良好的多克隆抗体，并将其应用于制备卡他莫拉菌乳胶微球免疫层析检测试纸条。

发明内容

本发明的目的是以多克隆抗体为基础，通过免疫乳胶标记技术研制一种操作简单、成本低廉、快捷迅速的检测卡他莫拉菌的乳胶微球免疫层析检测试纸条。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种基于卡他莫拉菌表面蛋白的乳胶微球免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)卡他莫拉菌表面蛋白(M35+McaP)抗体制备：