[发明专利]一种抗人CA72-4糖蛋白的重组抗体

说明书

本发明涉及一种抗人CA72‑4糖蛋白的重组抗体，该抗体为包含CA72‑4糖蛋白抗原结合结构域的分离的结合蛋白，本发明还对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与人CA72‑4糖蛋白蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于CA72‑4糖蛋白蛋白的检测领域。

技术领域

本发明涉及免疫技术领域，具体而言，涉及一种抗人CA72-4糖蛋白的重组抗体。

背景技术

CA72-4是一种高分子量的糖蛋白抗原，相对分子量220-400KD，属Lewis血型抗原。其结构中有双抗原决定簇，识别癌细胞上不同的抗原决定簇的两种单株抗体B72-3及CC49。CA72-4在多种腺癌的组织、器官中可见，表达于乳腺、结肠、胰腺、胃、肺和卵巢癌组织，但不存在于良性肿瘤、渗出物或正常组织中，血清正常值小于6U/mL。

CA72-4是一种血清肿瘤标志物。血清肿瘤标志物是肿瘤细胞在发生和增殖过程中产生的某些生化物质，主要包括蛋白质、糖类、酶类等肿瘤标志，可存在于肿瘤细胞内或释放入患者体液中。通过对患者体液肿瘤标志的分析，可在一定程度上反映肿瘤的存在与否。研究证明，胃癌患者中CA72-4的血清浓度会有不同程度的升高，这是其作为肿瘤标志物的基础。

CA72-4对胃癌具有较高的敏感性。据报道，血清CA72-4在胃癌中的阳性率为36％-94％，其特异性也较高，部分甚至达到了100％。近年来，血清中肿瘤标志物CA19-9、癌胚抗原(CEA)、CA242及CA72-4作为恶性肿瘤基因表达的产物，可存在于患者的体液、血液和细胞中，对其采用生物学或免疫学方法进行鉴别是诊断胃癌的重要指标。

CA72-4表达水平与肿瘤的大小、分期以及转移有关，是判断胃癌病理分期的可靠肿瘤标记物。CA72-4对于病情的预后具有提示意义，胃癌患者术前血清CA72-4表达水平升高与患者死亡风险升高成正相关，术后表达水平可迅速下降至正常。CA72-4对患者化疗的检测也具有重要意义，CA72-4水平下降超过70％提示化疗出现病理反应。此外，CA72-4是一种广谱肿瘤标志物，在其他胃肠道肿瘤、乳腺癌、肝癌、卵巢癌中也呈现不同的检出率。

胃癌相关性肿瘤标志物包括CA72-4、CA19-9、CEA及胃蛋白酶原(PG)等。研究表明，早期胃癌患者的胃癌相关性肿瘤标志物CA72-4、CA19-9、CEA的单项检测具有较高的灵敏度和特异性。而胃癌相关性肿瘤标志物进行联合检测时，可具有互补的作用，可明显提高胃癌检出率。据报道，血清中肿瘤标志物CA72-4、CA19-9、CEA进行联合检测时，其灵敏度和特异性均高于单项检测。

临床上用于检测水平CA72-4的方法有酶联免疫吸附法(ELISA)，化学发光法，流式荧光发光法、胶体金等，不同方法都有各自的优缺点，但是都需要针对于CA72-4的特异性单克隆抗体。

目前国内用于检测CA72-4的单克隆抗体基本自外国采购，灵敏度、特异性上都存在缺陷，

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及一种新颖的包含CA72-4糖蛋白抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。

其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与CA72-4糖蛋白具有K_D≤1.97×10^-8mol/L的亲和力；

互补决定区CDR-VH1为G-X1-T-F-X2-D-X3-A-I-H，其中，

X1是F或Y，X2是S、Y或T，X3是N、H或Q；

互补决定区CDR-VH2为Y-F-X1-P-G-X2-D-D-F-K-X3-N-E-R，其中，

X1是S或T，X2是Q、GG或N，X3是S、Y或T；