[发明专利]一种抗Taq DNA聚合酶的抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种新颖的包含Taq DNA聚合酶抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与Taq DNA聚合酶具有很高的亲和力，应用于分子检测领域。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学技术领域，尤其是涉及一种抗Taq DNA聚合酶的抗体及其应用。

背景技术

1988年，Randall K.Saiki等从水生栖热菌(Thermus aquatics)中分离纯化到了Taq DNA聚合酶，Taq聚合酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，这在需要高温环境的PCR反应中有着重要意义。因此，Taq聚合酶取代了之前常用于PCR反应的大肠埃希菌中的DNA聚合酶。PCR反应中应用Taq聚合酶，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷，大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。然而Taq DNA聚合酶在使用过程中也存在一定的缺陷，即在常温下，其也具有一定的酶学性质，进而导致在PCR扩增过程中会出现非特异性和引物二聚体的扩增，以及长期稳定性存在问题。

所以，随着PCR技术应用的普及以及对PCR扩增质量要求的提高，不断出现新的方法和技术，其中热启动酶技术的出现得以使普通Taq DNA聚合酶的酶学性质得到质的提升，目前常用的方法有抗体修饰的热启动酶和化学修饰的热启动酶，其中抗体修饰的热启动酶使用较为普遍。

抗体修饰热启动酶是需要用到特异性Taq酶的单克隆抗体，特异性Taq酶的单克隆抗体与Taq DNA聚合酶结合后形成抗原抗体复合物，在室温下可以有效地封闭Taq DNA聚合酶的活性，使其在低温条件下不发挥聚合酶活性，在高温时，这种复合物会解离，释放出具有活性的Taq DNA聚合酶，再进行PCR扩增反应，这样可以有效地避免引物二聚体的形成，降低非特异产物的扩增，同时可以延长Taq DNA聚合酶的长期稳定性。

抗体修饰热启动酶用到的特异性Taq酶的抗体还有待进一步开发。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及一种新颖的包含Taq DNA聚合酶抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。

所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与Taq DNA聚合酶具有K_D≤8.568×10^-9mol/L的亲和力；

互补决定区CDR-VH1为S-V-X1-T-F-X2-T-Y-Y-X3-Y，其中，

X1是D、E或N，X2是S或T，X3是I或L；

互补决定区CDR-VH2为G-X1-N-P-T-S-X2-P-V-F-X3-E-K，其中，

X1是I、V或L，X2是N或GG，X3是D、E或N；

互补决定区CDR-VH3为T-R-S-X1-X2-R-R-G-Y-Y-X3-D-Y，其中，

X1是I、V或L，X2是I、V或L，X3是F或P；

互补决定区CDR-VL1为R-X1-S-Q-D-I-X2-N-Y-X3-N，其中，

X1是A或G，X2是N或Q，X3是I、V或L；

互补决定区CDR-VL2为I-Y-X1-T-S-R-L-X2-S-G-X3-P，其中，

X1是Y或F，X2是Q、H或N，X3是I、V或L；

互补决定区CDR-VL3为Q-D-D-T-X1-P-X2-T-X3-G，其中，

X1是I、V或L，X2是I、V或L，X3是W或F。