[发明专利]一种微生物多样性的提取方法

说明书

本发明提供了一种微生物多样性的提取方法,包括如下步骤：样品细胞破碎处理步骤；96孔板提取步骤：13000×g(12000rpm)室温离心5min。转移600μl上清至96深孔板中，加入200μl Buffer SP2后混匀，加入100μl HTR Reagent；冰浴5min。4000×g(3700rpm)离心10min；转移上清400μl至96深孔板中，加入40μl磁珠，450μl Binding Buffer，混匀，室温放置2min；后借助仪器进行96孔板的操作。本发明通过更简便和稳定快速的方法，节约了人员操作时间，减少了因多个步骤所导致的误差，在大批量样本的处理时，也具规范性和可操作性。

技术领域

本发明涉及微生物分析技术领域，具体涉及一种微生物多样性的提取方法。

背景技术

随着生物学的发展，对于环境中微生物的研究逐渐增加，而从环境中提取菌群总DNA的方法是进行分析的关键，伴随着技术的成熟及其样本数量的增加，单管提取DNA已经不适合大批量的操作。

现有的微生物多样性的提取方法为单管提取，而当样本量较大时，单管提取需要耗费更多的人力物力，而目前对于样本提取而进行后续DNA分析的大量需求的大背景下，如何提高样本提取的效率的同时保证提取的质量，是目前提取方法的主要发展方向。

发明内容

为了克服现有技术所存在的上述缺陷，本发明的目的之一在于提供一种微生物多样性的提取方法。

为了实现本发明的目的之一，所采用的技术方案是:一种微生物多样性的提取方法,包括如下步骤：

样品细胞破碎处理步骤；

96孔板提取步骤；其中，96孔板处理步骤包括：13000×g(12000rpm)室温离心5min。转移600μl上清至新的96深孔板中，加入200μlBuffer SP2，用手轻轻振荡混匀，加入100μl HTR Reagent(用前混匀，吸取时要注意粘稠，可以适当剪一下枪头)，振荡混匀充分；冰浴5min-10min。4000×g(3700rpm)离心10-15min；小心地转移上清400μl至96深孔板中，加入40μl磁珠，450μl Binding Buffer，混匀，室温放置2min；后续借助相关仪器进行96孔板的操作。

在本发明的一个优选实施例中，所述的一种微生物多样性的提取方法具体包括以下步骤：

1)将预处理好的样品放到对应编号且预装有500mg glassbeads的2ml离心管中；

2)向上述样品管中加入0.8ml Buffer SLX Mlus，于组织破碎仪25HZ振荡7-10min；

3)加入80μl Buffer DS,振荡混匀；

4)90℃孵育10-15min，孵育期间颠倒离心管以混匀其中液体1～2次(因不知样品中是否含有难裂解的细菌，故将孵育温度提高至90℃)；

5)13000×g(12000rpm)室温离心5min。转移600μl上清至新的96深孔板中，加入200μlBuffer SP2，用手轻轻振荡混匀。加入100μl HTR Reagent(用前混匀，吸取时要注意粘稠，可以适当剪一下枪头)，振荡混匀充分；

6)冰浴5-10min。4000×g(3700rpm)离心10min；

7)小心地转移上清400μl至96深孔板中，加入40μl磁珠，450μl Binding Buffer，混匀，室温放置2-5min；

8)后续借助相关仪器进行96孔板的操作。

本发明的有益效果在于：