[发明专利]芽孢杆菌WZZ006及其应用

权利要求书

1.芽孢杆菌(Bacillus sp.)WZZ006，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO：M 2017621，保藏日期2017年10月23日，地址为中国，武汉，武汉大学，邮编430072。

2.一种权利要求1所述芽孢杆菌WZZ006在拆分外消旋5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：以芽孢杆菌WZZ006经发酵培养获得的湿菌体冷冻干燥后的干菌体为催化剂，以外消旋5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯为底物，以pH值5.0～7.0的缓冲液为反应介质，在20～45℃、100～300r/min条件下反应完全后，获得含S-(+)-5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的转化液，将转化液分离纯化，获得S-(+)-5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述底物初始浓度以缓冲液体积计为4.2～200mM，干菌体加入量以缓冲液体积计为2～10g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：

(1)斜面培养：将芽孢杆菌WZZ006接种至斜面培养基，在30℃、180r/min条件下培养24h，获得斜面菌体；斜面培养基组成：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 1g/L，琼脂粉15～20g/L，pH7.0，溶剂为去离子水；

(2)种子培养：取步骤(1)斜面菌体接种于种子培养基，在30℃、180r/min条件下培养24h，获得种子液；种子培养基组成：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 1g/L，pH 7.0～7.2，溶剂为去离子水；

(3)发酵培养：在无菌条件下，取步骤(2)种子液以体积浓度1-2％的接种量接种于发酵培养基中，在30℃、180r/min条件下培养24h，获得发酵液，取发酵液在10000rpm离心10min，弃上清液，收集湿菌体，用0.2M pH7.0的磷酸盐缓冲液洗涤3次，收集菌体真空冷冻干燥，获得冻干菌粉；发酵培养基组成为：葡萄糖15g/L，牛肉膏15g/L，K₂HPO₄·3H₂O 6g/L，KH₂PO₄3g/L，MgSO₄·7H₂O 1.0g/L，NaCl 0.5g/L，pH 6.5，溶剂为去离子水。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述分离纯化的方法为：反应完毕后得到的转化液，10000rpm离心10min后上层溶液真空旋蒸至干，获得浓缩物；将浓缩物用二氯甲烷溶解，采用正相硅胶柱层析，用体积比1:3的乙酸乙酯：石油醚进行洗脱，流速8ml/min，TLC跟踪检测，收集Rf＝0.30的组分，减压浓缩至干，得产物S-(+)-5-氯-2,3-二氢-2-羟基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯。