[发明专利]3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸的衍生物、均相酶免疫检测试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸衍生物，其特征在于，其结构式如式(Ⅰ)所示：

2.根据权利要求1所述的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)化合物3的合成：将化合物1和化合物2溶解于二甲基甲酰胺中，加入K₂CO₃，搅拌12小时，加入纯化水，经二氯甲烷萃取3次，将萃取得到的有机相通过Na₂SO₄干燥，浓缩，通过硅胶干燥柱纯化，得到化合物3；

(2)3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸衍生物的合成：将化合物3和苄基三乙基氯化铵溶解于CHCl₃中，逐滴加入NaOH溶液，56℃搅拌2.5小时后，HCl调节至pH＝4，用乙酸乙酯萃取3次，将萃取得到的有机相干燥，浓缩，经制备级高效液相色谱仪纯化，得到白色固体状化合物，即为3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸衍生物；

3.一种3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸均相酶免疫检测试剂，其特征在于，所述的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸均相酶免疫检测试剂包括试剂A和试剂B；

所述的试剂A中包含抗3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸特异性抗体和均相酶底物；

所述的试剂B包含3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸酶标偶联物和Tris缓冲液；

所述的均相酶底物由葡萄糖-6-磷酸、氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和Tris缓冲液配制而成；

所述的抗3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸特异性抗体是通过3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸免疫原免疫实验动物后获得的，所述抗体为完整抗体分子，或者为保留与3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸特异性结合能力的抗体片段或抗体衍生物，所述实验动物为兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马；

所述的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸免疫原是由权利要求1所述的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸衍生物或权利要求2所述的制备方法制备得到的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸衍生物与载体连接而成的化合物，其结构式如下述式(Ⅱ)所示：

所述的载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽；

所述的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸酶标偶联物是由权利要求1所述的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸衍生物或权利要求2所述制备方法制备得到的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸衍生物与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶连接而成，其结构式如下述式(Ⅲ)所示：

4.根据权利要求3所述的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸均相酶免疫检测试剂，其特征在于，所述的载体为血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白；所述的实验动物为兔。

5.一种权利要求3所述的3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸均相酶免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a1)试剂A的制备：将抗3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸特异性抗体加入均相酶底物中，得到试剂A，所述的试剂A中抗3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸特异性抗体与均相酶底物的体积比为1:100-1:10000；

(a2)试剂B的制备：将3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸酶标偶联物溶于Tris缓冲液中，得到试剂B，所述的试剂B中3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸酶标偶联物与Tris缓冲液的体积比为1:100-1:10000。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的试剂A中抗3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸特异性抗体与均相酶底物的体积比为1:250-1:1250；

所述的试剂B中3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸酶标偶联物与Tris缓冲液的体积比为1:500-1:2500。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的试剂A中抗3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸特异性抗体与均相酶底物的体积比为1:750；

所述的试剂B中3-(3-羟基苯基)-3-羟基丙酸酶标偶联物与Tris缓冲液的体积比为1:1500。