[发明专利]一种用于葡萄汁真伪鉴定的液相色谱-同位素质谱联用方法

权利要求书

1.一种用于葡萄汁真伪鉴定的液相色谱-同位素质谱联用方法，其特征在于，步骤如下：

S1、纯正葡萄汁制备：采购企业或大型超市销售的新鲜、饱满、无病斑、整粒的葡萄，不经特殊处理后榨取纯正葡萄汁并冷冻保存备用。

S2、葡萄汁样品准备：采购不同超市来源的不同品牌的市售葡萄汁(纯正或添加糖)。

S3、分别称取一定量的S1和S2中的葡萄汁(0.2-0.4mg)，超纯水稀释定容至20mL，充分涡旋，经水相滤膜过滤后进行液相－同位素比质谱分析。

S4、使用Survey液相色谱仪与DELTA V Advantage同位素质谱仪(美国ThermoScientific公司)联用检测，其中液相色谱(HPLC)条件包括：色谱柱：Rezex RCM-Monosaccharide Ca²⁺(7.8*300mm)；柱温：80℃；流动相：超纯水；流速：350μL/min；氧化剂(0.14mol/L过硫酸钠溶液和0.34mol/L磷酸溶液)流速：50μL/min；氧化炉温度：99.9℃；进样体积：6-12μL。同位素质谱(IRMS)条件包括：电子轰击离子源(Electron impact ionsource EI)；氦气Purge压力：1.4bar；氦气carrier压力：2.0bar；二氧化碳压力：0.5bar；离子源电压：3.06KV；真空度：1.8×10^-6mbar；扫描方式：正离子扫描；测定质量数：44/45/46。

S5、仪器测定及进样：进样前仪器平衡至少15min，待流动相压力≤60bar，二氧化碳(44)背景值≤300mV，氧气(32)值≥5000mV，并进行RefCO₂ On/Off测试，d¹³C/¹²C Std.Dev.小于0.06‰，方可开始进样。

S6、葡萄汁样品中糖类物质的δ¹³C值的确定使用软件Isodat 3.0。δ¹³C值的计算基于国际标准物质Viennapeedee belemnite standard(VPDB)，计算公式为：δ¹³C＝(R_sample－R_VPDB)/R_VPDB×1000，其中R_sample为样品的¹³C与¹²C的同位素比值¹³C/¹²C，R_VPDB＝0.0112372。高纯CO₂参考气体的δ¹³C标定值为-17.80‰。

2.根据权利要求1中的步骤确定判定葡萄汁真伪的规则，其特征在于：首先分析纯正葡萄汁的LC-IRMS色谱图，随后其中果糖和葡萄糖的δ¹³C的差值范围确定纯正葡萄汁的判定规则。