[发明专利]一种可常温运输的环介导等温扩增试剂、制备方法及应用

权利要求书

1.一种可常温运输的环介导等温扩增试剂，其特征在于，包括Bst DNA Polymerase、dNTP、引物混合物、指示剂、保护剂和气溶胶污染预防剂；

Bst DNA Polymerase、dNTP、引物混合物、指示剂、保护剂和气溶胶污染预防剂按照体积比例为1~2:3~7:1~2:1~2:5~8:3~7的比例混合；

所述的引物混合物中包含引物FIP、BIP、LF、LB、F3和B3；

所述的指示剂中包含HNB溶液和Gelgreen溶液；所述HNB溶液的浓度为5~10mM，HNB溶液、Gelgreen溶液和去离子水按照体积比为5~10:1~10:1~2的比例混合；

所述的保护剂由50µl 2%牛血清白蛋白、50µl 0.05%大豆卵磷脂、10µl 100mM甘露醇、50µl 0.25%羟乙基淀粉、340µl去离子水组成或由75µl 2%牛血清白蛋白、75µl 0.05%大豆卵磷脂、50µl 100mM甘露醇、50µl 0.25%羟乙基淀粉、250µl去离子水组成；

所述的气溶胶污染预防剂由甘草甜素、海藻酸钠和叔丁醇组成；所述甘草甜素、海藻酸钠和叔丁醇按照质量比为1~10:1~20:1~50的比例混合。

2.如权利要求1所述的可常温运输的环介导等温扩增试剂，其特征在于，所述的引物FIP、LF和F3按照物质的量浓度比例为4~8:2~4:1~2混合，引物BIP的浓度与FIP相同，引物LB的浓度与LF相同，引物F3的浓度与B3相同。

3.如权利要求1所述的可常温运输的环介导等温扩增试剂，其特征在于，所述环介导等温扩增试剂的使用方法为：将环介导等温扩增试剂和缓冲液混合，加入待测模板，然后置于63~67℃恒温条件中反应30~60min，再升温至83~87℃反应5min即可；

其中，缓冲液由甜菜碱、KCl、Tris-HCl、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄按照质量比为50~100:2~5:2~5:1~2:0.8~1混合而成，Tris-HCl的pH值为6.8~8.8。

4.权利要求1至3任一项所述的可常温运输的环介导等温扩增试剂的制备方法，其特征在于，将所述Bst DNA Polymerase、dNTP、引物混合物、指示剂、保护剂和气溶胶污染预防剂混合，在-70~-80℃下冷冻干燥8~16h，即可得环介导等温扩增试剂。