[发明专利]一种利用HPLC特征图谱检测鉴别白芍与酒白芍的方法

说明书

本发明公开了一种利用HPLC特征图谱检测鉴别白芍与酒白芍的方法，该方法包括白芍饮片与酒白芍饮片供试品溶液的制备；分别精密吸取白芍饮片与酒白芍饮片供试品溶液注入液相色谱仪，建立白芍饮片与酒白芍饮片的特征图谱，计算各特征峰的相对峰面积与相对保留时间；利用方差分析法，分析白芍饮片酒炙前后的差异性物质；将待测白芍样品与白芍饮片与酒白芍饮片的特征图谱进行比较，计算1,2,3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖的相对峰面积，确定白芍样品是否酒炙。与药典规定的芍药苷含量检测方法相比，该方法能够有效、准确、特征性强的鉴别白芍与酒白芍饮片差异，对临床酒白芍饮片质量控制具有十分重要的意义。

技术领域

本发明属于化学药、中药成分研究技术领域，具体涉及一种利用HPLC特征图谱检测鉴别白芍与酒白芍的方法。

背景技术

白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。其性味性苦、酸，微寒；归肝、脾经。生品白芍具有具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳功效；酒白芍，是中国药典2015年版“白芍”项下收载的一种炮制品，是白芍饮片经酒炙所得，具有养血和络、缓脾止痛的功效，可用于治疗脾虚或肝脾不和之泄泻腹痛。白芍酒炙后，降低了酸、寒之性，其止痛、镇静作用增强。

目前中国药典项下中药饮片的鉴别主要性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别。其中理化鉴别主要包括物理鉴别、化学鉴别、光谱鉴别、色谱鉴别等，色谱鉴别，仍以薄层色谱鉴别为主。而中药饮片生品与炮制品鉴别在中国药典2015年版中甚少体现。主要原因是由于中药生品与炮制品物质成分差异研究存在不足，化学信息差异难以把控。

中国药典2015年版分别规定白芍饮片单一成分芍药苷芍药苷含量不得低于1.6％、酒白芍饮片芍药苷含量不得低于1.2％，但是从该成分含量限度上无法判别白芍是否酒炙，因此非常有必要研究生品与炮制品的内在差异性成分，建立一种检测鉴别白芍与酒白芍的方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种利用HPLC特征图谱检测鉴别白芍与酒白芍的方法。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种利用HPLC特征图谱检测鉴别白芍与酒白芍的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)白芍饮片与酒白芍饮片供试品溶液的制备：

分别将白芍饮片和酒白芍饮片粉碎成中粉，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流或超声处理15-45分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(2)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；进样量为10μl；检测波长为230nm；

(3)特征图谱的建立：

分别精密吸取白芍饮片与酒白芍饮片供试品溶液注入液相色谱仪，分析，记录白芍饮片、酒白芍饮片的液相色谱图，建立白芍饮片与酒白芍饮片的特征图谱，计算各特征峰的相对峰面积与相对保留时间；

(4)利用方差分析法，置信水平阈值设定为0.05，将置信水平小于0.05的物质视作具有显著性差异的化合物，分析白芍饮片酒炙前后的差异性物质，将1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖的相对峰面积作为白芍饮片与酒白芍饮片的鉴别依据；

(5)鉴别：