[发明专利]一种猪伪狂犬病毒高效价阳性血清制备方法

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒高效价阳性血清的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：

(1)水相制备：猪伪狂犬病病毒抗原原液经二乙烯亚胺处理，即得；

(2)免疫增强剂制备：使用氯化钠溶液配制含0.1～1mg/L PolyI∶C、0.05～1mg/L胞壁酰二肽、0.5～1mg/L西咪替丁的溶液，为混合液A；在1份混合液A中加入1～10份吐温-80、0.5～10份匹多莫德、1～10份司盘-80、1～10份白油，前述的“份”均以体积计算；

(3)灭活疫苗制备：将前述水相和免疫增强剂按1:(40～160)体积比混合成为混合液B，将混合液B与弗氏完全佐剂按1:(0.5～2)的体积比混合，乳化得灭活疫苗；

(4)免疫：使用上述疫苗对兔子进行免疫，琼脂免疫扩散试验中测定血清中和滴度大于等于1:16时采血、制备血清。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述抗原原液的效价≥10^8.0TCID₅₀/ml。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述抗原原液与二乙烯亚胺的比例是100:1。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述处理的具体方式是：将抗原原液与二乙烯亚胺混合物置于37℃下转速在3000转/min摇的床内摇48h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述混合液A含有PolyI∶C0.4mg/L、胞壁酰二肽0.05mg/L、西咪替丁0.5mg/L。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述吐温-80为10份；所述匹多莫德为10份；所述司盘-80为5份；所述白油为10份。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述免疫增强剂与水相的混合比例是100:1。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)所述多点注射灭活疫苗的方式为：在第1次免疫时共注射2ml，第2、3次免疫时每次共注射4ml，第4、5次免疫时每次共注射6～8ml。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)所述采血为心脏无菌采血。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)所述制备血清的方法是：将血液置于37℃热激1h，再在4℃静置2h，低温离心、吸取血清，分装后56℃灭活，-70℃下保存。