[发明专利]一种检测ATP活性的生物传感器及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 201811568677.X | 申请日： | 2018-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN109507168A | 公开（公告）日： | 2019-03-22 |
| 发明（设计）人： | 王玉;王海旺;黄加栋;刘素;王敬锋;宋晓蕾;张雪;李莎莎;赵一菡;瞿晓南;张儒峰 | 申请（专利权）人： | 济南大学 |
| 主分类号： | G01N21/65 | 分类号： | G01N21/65 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250022 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 纳米金颗粒 表面增强拉曼散射 生物传感器 团聚 核酸链 纳米金 表面等离子体共振 生物传感器技术 高盐缓冲液 核酸适配体 金纳米颗粒 三磷酸腺苷 特异性结合 催化水解 活性检测 拉曼光谱 拉曼散射 电磁场 核酸酶 种检测 染料 底物 光谱 修饰 制备 灵敏 置换 释放 检测 应用 安全 | ||
1.一种检测ATP活性的生物传感器，其特征在于，包括3条DNA核酸链、金纳米颗粒、缓冲液、外切酶III、目标物ATP；
所述的DNA核酸链，其名称和序列为：
Walker Chain序列如SEQ No.1所示；
Track Chain序列如SEQ No.2所示；
Protect Chain序列如SEQ No.3所示。
2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述的Track Chain核酸链5’端标记的HS。
3.一种权利要求1所述生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将Walker Chain和Protect Chain退火杂交，形成双螺旋结构，得到反应液；
（2）取步骤（1）的反应液和Track Chain一起放入到纳米金溶液中，通过不断地增加盐浓度，使Track Chain核酸链5’端标记的HS-同Au形成Au-S键，从而将核酸链稳定的标记在金纳米颗粒的表面，得到修饰了核酸链的纳米金颗粒溶液；
（3）在10×Buffer 缓冲液中，加入步骤（2）得到的溶液，再加入外切酶III，加入目标物ATP；样品混合后置于37 ℃温浴中反应；
（4）反应完成后，取反应液放置于硅片上面进行拉曼光谱检测分析，得到相应的拉曼指纹图谱。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）中Walker Chain和Protect Chain的浓度比1:1。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）的退火条件为：将以上两种组分混合后放95℃水浴5分钟，关掉电源，自然冷却到室温，取出反应液，放-20℃备用。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）中反应液和TrackChain的浓度比为20:1。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）中纳米金与TrackChain核酸链的浓度比为1:3000。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的（2）中盐为NaCl，其终浓度为0.3 M。
9.权利要求1所述的生物传感器在药物敏感实验中的应用。
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