[发明专利]一种酸枣仁黄酮类成分UPLC指纹图谱的建立方法及应用

说明书

本发明公开了一种酸枣仁黄酮类成分UPLC指纹图谱的建立方法及应用。本发明建立了能快速鉴定酸枣仁真伪的酸枣仁黄酮类成分UPLC指纹图谱，分析未知样品时，只需提取药材黄酮类成分，测定其UPLC指纹图谱，计算未知样品与共有模式的相似度，即可对未知样品进行鉴定、分类和评价。该方法快速、稳定且专属性强，基线平稳，为酸枣仁药材质量控制提供科学的新方法。

技术领域

本发明属于中药鉴别领域，具体涉及一种酸枣仁黄酮类成分UPLC指纹图谱的建立方法及应用。

背景技术

酸枣仁是鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa(Bunge)Hu exH.F.Chow的干燥成熟种子，主要分布在我国辽宁、河北、河南、山东、山西等省。酸枣仁主要含皂苷类、黄酮类、生物碱、脂肪酸、氨基酸、酸枣多糖及微量元素，具有镇静、催眠、降压降血脂等多种药理作用；因此，中医临床常首选酸枣仁为君药组方治疗虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴等症。由于良好的临床疗效及广泛的临床应用，酸枣仁需求量增大、价格上涨，导致出现伪品及掺伪品。

文献报道酸枣仁质量控制研究主要为HPLC-ELSD指纹图谱，也有部分低波长HPLC-UV指纹图谱，虽然分析信息全面，但是检测信号基线漂移严重，容易丢失峰信息且精密度较差。相关研究也报道了酸枣仁药材具有大量的黄酮类成分，目前，尚无对酸枣仁黄酮类成分UPLC指纹图谱的研究报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种酸枣仁黄酮类成分UPLC指纹图谱的建立方法，该方法快速、稳定且专属性强，为酸枣仁药材质量控制提供科学的新方法。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种酸枣仁黄酮类成分UPLC指纹图谱的建立方法，包括如下步骤：

(a)混合对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素、木兰花碱对照品适量，用甲醇配制成每1ml含斯皮诺素20μg、木兰花碱15μg的混合对照品溶液；

(b)供试品溶液的制备：酸枣仁粉末过筛，取1.0g，精密称定，置锥形瓶中，加50-70％甲醇20-30ml，称定质量，加热回流提取40-60分钟，放冷，再称定质量，用50-70％甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得；

(c)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、0.05％甲酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱：0～7min，3％～15％A；7～10min，15％～17％A；10～15min，17％A～17％A；15～20min，17％～25％A；20～25min，25％～90％A；柱温：35℃；检测器：PDA；检测波长：254nm；流速：0.4ml/min；进样体积：1μl；

(d)黄酮类成分UPLC指纹图谱的建立：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图；再将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》，建立酸枣仁黄酮类成分UPLC指纹图谱的共有模式图并计算相似度，确定具有26个共有峰；

(e)色谱峰的指认：通过UPLC-Q-TOF-MS方法对26个共有峰进行成分的分析与指认，鉴定出6个黄酮类成分共有峰。

进一步优选的，所述(b)中，供试品溶液的制备：酸枣仁粉末过65目筛，取1.0g，精密称定，置锥形瓶中，加70％甲醇20ml，称定质量，加热回流提取60分钟，放冷，再称定质量，用70％甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得。