[发明专利]一种生防DSE菌株LS1及其在香蕉枯萎病上的应用

说明书

本发明提供一种生防DSE菌株LS1及其在香蕉枯萎病上的应用，该菌株保藏号为CGMCC NO.16498，保藏开始时间为2018年11月8日。本发明通过室内平皿和盆栽实验筛选到了一株生防DSE菌株LS1，其平皿防治效果高达86.19%，盆栽防治效果为63.19%。该菌株在平皿和盆栽试验中的防效表现还算比较稳定。

技术领域

本发明涉及一种微生物领域，尤其涉及一种DSE菌株Cladosporiumchlorocephalum LS1对香蕉枯萎病的生防作用。

背景技术

香蕉是我国南方亚热带地区重要的经济作物。2013年广西香蕉种植面积约9万公顷，产量275.2万吨，相比2005年产量翻了一倍。但是由于香蕉的规模化连作种植，导致了土传病害香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)的多发危害。该病可引起病株凋萎、维管束坏死，病重田块发病率高达90％，严重制约广西香蕉产业的发展。受抗病品种产量不佳，化学药剂防治不理想等防治手段的制约，经济又环保的生物防治技术逐渐成为防治该病的研究热点。

目前来说，深色有隔内生真菌(Dark Septate Endophyte,DSE)是一类菌丝深色有分隔，可形成“微菌核”的土壤子囊菌或半知菌，其定殖在植物根组织细胞内或细胞间隙，对宿主无致病性。许多研究表明DSE能与宿主互惠共生，在抗逆、促生、防病等方面都发挥着积极的生态功能，且其定殖广泛，宿主非专一性，使得植物-DSE共生体作为继豆科植物-根瘤共生体、菌根共生体后的又一种植物与微生物共生关系的表现形式，在菌根研究领域逐渐受到重视。2017年，张晓蓉等通过接种DSE真菌甘瓶霉Phialophora mustea K36与Z48显著缓解番茄受尖孢镰刀菌抑制生长的症状；农倩等筛选获得一株对香蕉枯萎病有较强生防能力的DSE菌株L-14(裂壳菌Schizothecium sp.)。2018年，Surono等发现在芦笋上接种DSE真菌Phialocepahala fortinii CKG.I.11能促进芦笋的生长并对枯萎病有抑制作用。

发明内容

之前的研究中，申请人已发现对香蕉枯萎病具优良生防作用的DSE菌株，但数量仍非常有限，为了今后复合菌剂的研发仍需加大优良菌株的筛选力度。为此，本发明的目的是对本实验室保存的其他DSE菌株进行生防效果的测定，并进行分类鉴定。本发明旨在筛选获得高效、稳定的香蕉枯萎病生防菌株，为香蕉枯萎病生防菌剂的开发提供更为丰富的菌种资源。

一种防治香蕉枯萎病的内生真菌LS1，保藏号为CGMCC NO.16498，保藏时间为2018年11月8日。保藏单位：CGMCC-中国普通微生物菌种保藏管理中心、分类命名：Cladosporiumchlorocephalum；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明提供一种生防DSE菌株LS1及其在香蕉枯萎病上的应用，其应用方法包括如下几个步骤：

步骤A:菌株接种及其对香蕉生长的影响:将供试DSE菌株活化后接种于燕麦培养基上，选取长势一致的香蕉组培苗移栽至菌落上，根系平铺于菌落表面，每个菌落移栽一株，培养皿放至组培瓶，放入培养箱中培养；测定香蕉的株高、茎宽、鲜重和干重；各处理的部分新鲜香蕉根样用于DSE的定殖观察及再分离，记录预留部分的样品质量，其余部分称量鲜重后烘箱干燥至恒重，测量干重，计算平均含水量，并将之前预留的新鲜根样经换算后一起计算入干重；

步骤B:菌株的再分离与定殖检测:取适量新鲜根样，切小段放置试管中，加入KOH溶液完全浸没根段，于恒温水浴锅中解离，使根段软化透明，用墨水醋进行染色后清水漂洗并浸泡脱色，观察DSE在香蕉根部的定殖情况，并计算定殖率(定殖率％＝(定殖根段数/被镜检根段总数)×100％)；

步骤C:菌株对香蕉枯萎病的防治效果测定:将DSE-香蕉共生体(连同燕麦培养基)移至长有镰刀菌的水琼脂培养基上，未接菌的对照香蕉组培苗直接接入带有镰刀菌的水琼脂平板上；观察记录病级、计算病情指数和防治效果；