[发明专利]一株能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株在审
| 申请号： | 201811572606.7 | 申请日： | 2018-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN111349594A | 公开（公告）日： | 2020-06-30 |
| 发明（设计）人： | 曹国强;白挨玺;严婷;孙艳;徐红 | 申请（专利权）人： | 南京百斯杰生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12N15/54;C12N9/10;C12R1/125 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;夏平 |
| 地址： | 211100 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 能够 生产 谷氨酰胺 转氨酶 菌株 | ||
1.一株能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，将枯草芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶的基因AprE、中性蛋白酶的基因NprE以及sigF基因进行敲除，构建宿主菌株；然后将MTG酶原基因的表达框整合到宿主菌株中，得到能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株。
2.根据权利要求1所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原基因的表达框整合到所述宿主菌株的amyE位点。
3.根据权利要求1或2所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原基因的表达框包括启动子序列，核糖体结合位点序列，信号肽序列，proMTG编码序列以及终止子序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原基因的表达框是通过构建MTG酶原的整合质粒整合到所述宿主菌株中。
5.根据权利要求4所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原整合质粒的构建方法为：将枯草芽孢杆菌基因组中的amyE部分基因片段及其两侧序列整合到质粒pksB上，构建质粒pksB-amyFR；将MTG酶原基因的表达框插入质粒pksB-amyFR中，得到MTG酶原的整合质粒。
6.根据权利要求5所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原基因的表达框序列插入质粒pksB-amyFR中的amyF和amyR之间。
7.根据权利要求5所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述的pksB质粒包括温度敏感型的复制起点和一个红霉素抗性基因。
8.根据权利要求1所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述的的AprE基因序列如SEQ ID NO.3所示。
9.根据权利要求1所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述的的NprE基因序列如SEQ ID NO.4所示。
10.根据权利要求1所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述的的sigF基因序列如SEQ ID NO.5所示。
11.根据权利要求1所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，采用连续性方式单交叉坎贝尔型机制对上述的3个基因进行敲除。
12.根据权利要求1所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原表达框如SEQ ID NO：2所示。
13.权利要求1-12中任一项所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株在生产谷氨酰胺转氨酶中的应用。
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