[发明专利]一种多肽的大规模制备方法和应用

权利要求书

1.一种多肽的大规模合成方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)以2-氯三苯基氯树脂为起始原料，连接第一个Fmoc保护氨基酸，使用封闭试剂封闭；

(2)以Fmoc保护氨基酸为单体，六氢吡啶溶液为脱保护试剂，在缩合剂和碱性条件作用下，依次逐个接上氨基酸，合成全保护的肽序列；

(3)对步骤(2)中得到的全保护的肽序列进行切肽、浓缩，得到多肽粗品；

(4)粗品提纯后得到多肽产品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述2-氯三苯基氯树脂取代率为0.85-0.99mmol/g；和/或

所述封闭试剂为DCM、甲醇、DIEA的混合液，其中所述混合液中DCM体积份数为70～90份，优选为75～85份；甲醇的体积份数为5～20份，优选为10～15份；DIEA的体积份数为5～10份，优选为5～8份。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)或步骤(2)中，保护的氨基酸单体Fmoc保护的氨基酸选自以下一种或多种：Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，合成全保护的肽序列的方法包括以下步骤：

(a)除去链接固相载体的上第一个氨基酸的Fmoc保护基；

(b)进行缩合反应，将第二个氨基酸的羧基共价链接在第一个氨基形成肽键；

(c)按照肽链顺序，重复步骤(a)和步骤(b)使肽链从C端向N端生长，直至达到所需要的肽链长度；

上述步骤(a)至(c)均在氮气保护下进行。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括对疏水氨基酸进行封端反应的步骤；

其中所述封端试剂为DMF、乙酸酐、DIEA混合溶液，所述混合液中DMF的体积份数为40～80份，乙酸酐的体积份数为10～40份，DIEA的体积份数为10～30份；优选地，DMF的体积份数为50～70份，乙酸酐的体积份数为15～35份，DIEA的体积份数为15～30份；和/或

所述疏水氨基酸选自以下一种或多种：酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、蛋氨酸。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述六氢吡啶溶液浓度体积分数为5％～40％，优选为10％～25％；

所述六氢吡啶溶液的溶剂选自以下一种或多种：DMF、NMP、THF、DCM、DMSO；优选为DMF、DCM；

所用的缩合剂选自以下一种或多种：HATU、HBTU、TATU、TBTU，优选为HATU和/或HBTU；

所述的缩合剂投料比为氨基酸1～10倍当量，优选为1～5倍当量；

所述的碱为有机碱，优选为DIEA和/或NMP；和/或

所述的有机碱投料比为氨基酸的1～10倍当量，优选为1～5倍当量。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，还加入消旋剂，所用的消旋剂为HOAt和/或HOBt；和/或

所述的消旋剂投料比为氨基酸1～10倍当量，优选为1～5倍当量。