[发明专利]用于病原核酸扩增的引物组、病原核酸检测文库构建方法和病原检测方法

权利要求书

1.一种用于病原核酸扩增的引物组，其特征在于，所述引物组包括至少一对多重扩增引物，所述多重扩增引物包括正向引物和反向引物，每条正向引物和反向引物的结构包括通用引物扩增结构序列、样本标签序列和病原核酸特异性结合序列，所述通用引物扩增结构序列用于通用引物扩增，所述样本标签序列用于识别样本来源，所述病原核酸特异性结合序列用于特异性结合病原核酸目标区域。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述正向引物和反向引物的结构从5’端至3’端依次包括所述通用引物扩增结构序列、所述样本标签序列和所述病原核酸特异性结合序列。

3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组还包括至少一对通用扩增引物，所述通用扩增引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物包括与所述多重扩增引物的通用引物扩增结构序列至少部分互补或相同的序列，所述反向引物包括与所述多重扩增引物的通用引物扩增结构序列至少部分互补或相同的序列、文库标签序列以及任选存在的用于环化反应和/或测序所需的结构序列，其中，所述文库标签序列用于识别文库样本来源，所述文库样本是所述多重扩增引物的扩增产物。

4.根据权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述通用扩增引物中的反向引物的结构从3’端至5’端依次包括与所述多重扩增引物的通用引物扩增结构序列至少部分互补或相同的序列、所述文库标签序列以及任选存在的用于环化反应和/或测序所需的结构序列。

5.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述通用引物扩增结构序列选自LP-F或LP-R所示的任一序列：

LP-F：GACCGCTTGGCCTCCGACTT；

LP-R：ACATGGCTACGATCCGACTT。

6.根据权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述通用扩增引物的反向引物中与所述通用引物扩增结构序列至少部分互补或相同的序列是如下序列：

TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGGCC；

任选地，所述通用扩增引物的反向引物中任选存在的用于环化反应和/或测序所需的结构序列是如下序列：

AGCCAAGGAGTT；

任选地，所述通用扩增引物的正向引物是如下序列：

CACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT。

7.一种病原核酸检测文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：

采用权利要求3至6任一项所述的引物组中的多重扩增引物对病原核酸样本进行多重扩增，其中每个病原核酸样本对应一组具有样本标签序列的多重扩增引物，不同的病原核酸样本所对应的样本标签序列彼此不同；

将不同的病原核酸样本的多重扩增产物混合形成多个不同的文库样本；和

采用所述通用扩增引物对所述文库样本进行通用扩增，其中每个文库样本对应一对通用扩增引物，每对通用扩增引物中的反向引物具有文库标签序列，不同的文库样本所对应的文库标签序列彼此不同。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：

对所述通用扩增得到的产物进行环化得到可上机测序的病原核酸检测文库。

9.一种病原高通量检测方法，其特征在于，所述方法包括：

通过权利要求7或8所述的方法构建病原核酸检测文库；

对所述病原核酸检测文库进行高通量测序；

依据所述样本标签序列和文库标签序列对高通量测序数据进行拆分，得到对应于每个病原样本的测序读长数据；和

将每个病原样本的测序读长数据与参考序列比对，得到每个病原样本的检测结果。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述病原样本的检测结果选自病原分型检测结果、病原鉴定检测结果和病原耐药性检测结果中的至少一种。